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南京PRM靶向定量蛋白质组学项目

来源: 发布时间:2022-01-17

蛋白质组研究内容:1.蛋白质鉴定:可以利用一维电泳和二维电泳并结合Western等技术,利用蛋白质芯片和抗体芯片及免疫共沉淀等技术对蛋白质进行鉴定研究。2.翻译后修饰:很多mRNA表达产生的蛋白质要经历翻译后修饰如磷酸化,糖基化,酶原刺激等。翻译后修饰是蛋白质调节功能的重要方式,因此对蛋白质翻译后修饰的研究对阐明蛋白质的功能具有重要作用。基-受体结合分析。可以利用基因敲除和反义技术分析基因表达产物-蛋白质的功能。另外对蛋白质表达出来后在细胞内的定位研究也在一定程度上有助于蛋白质功能的了解。通过对正常个体及病理个体间的蛋白质组比较分析,我们可以找到某些“疾病特异性的蛋白质分子”。南京PRM靶向定量蛋白质组学项目

PRM靶向蛋白质组学:是一种基于Orbitrap为表示的高分辨、高精度质谱的离子监视技术,首先利用四级杆质量分析器的选择能力,用Q1选择目标肽段的母离子,随后在collisioncell中对母离子进行碎裂,然后利用Orbitrap分析器在二级质谱中检测所选择的母离子窗口内的所有碎片信息。这样能够对目标蛋白质、目标肽段(如发生翻译后修饰的肽段)进行选择性检测,即可对目标蛋白质/肽段进行相对(一定)定量。从而实现对复杂样本中的目标蛋白质/肽段进行准确地特异性分析。四川常规蛋白质组学质谱分析蛋白组学样本寄送前是否需要精确计数或是称量?

PRM靶向蛋白质组学:产品分类:a.相对定量(目的同WB)。b.一定定量(目的同Elisa)。技术优势:(1)无需抗体,可直接对样本中目标蛋白质进行定量分析。(2)高特异性、准确度和灵敏度,靶向检测目标蛋白对应的多个unique肽段。(3)通量高,可以同时实现几十个蛋白的定量检测。样本要求:动物及临床组织标本100mg/sample,血清、血浆200μL/sample,细胞、微生物1×107cells/sample。应用方向:验证修饰和非修饰定量蛋白组学结果;目标蛋白相对定量和一定定量分析。蛋白质组学属于后基因组时代的科学研究,针对基因表达产物进行检测与定量。

PRM靶向定量蛋白质组学分析流程是怎样的?要做PRM首先要明确目标蛋白(或多肽)是什么,设计和建立针对这些目标蛋白PRM质谱采集方法,然后对待测样品进行PRM数据采集,将得到的原始谱图数据导入分析软件提取子离子信息进行定量。另外,如果配制已知浓度的标准肽段,用PRM额外做一个标准曲线,即可实现一定的定量。PRM靶向定量蛋白质组学技术能应用到哪些方面?研究工作中涉及到蛋白或多肽定量的都可以通过PRM技术来实现。具体说来,比如验证定量蛋白质组学中某些蛋白的变化,多肽的相对和一定的定量,想做蛋白定量却没有抗体,针对蛋白修饰位点的定量,想同时定量多个蛋白的情况等,都可以用PRM来做。蛋白质组学技术有生物质谱。

常规蛋白质组学:Labelfree多肽组学:顾名思义,就是不使用任何标记方法,直接对肽段进行质谱鉴定和定性定量分析。实验流程简单,只需要对蛋白进行常规酶解和除盐步骤即可上机。定量方式分为两种:峰面积(Peakintensity)和峰计数(Spectralcount),常用的是峰面积。不过,由于质谱采集时只选取topN的母离子进行二级碎裂和MS2检测,所以会丢失一些丰度较低的肽段信息,缺失值比较多。TMT/iTRAQ标记定量蛋白组学:TMT全称是TandemMassTag,是经典化学标记试剂,普遍用于差异表达蛋白质组分析研究中。该技术采用6重、10重或16重同位素标签,与肽段的氨基发生共价结合反应,可实现同时对6个/10个/16个不同样品中蛋白质的定性和定量分析。(目前16标鹿明生物可提供技术服务)。蛋白质组学由此获得蛋白质水平上的关于疾病发生,细胞代谢等过程的整体而全方面的认识。南京PRM靶向定量蛋白质组学项目

蛋白质组学将成为寻找疾病分子标记和药物靶标比较有效的方法之一。南京PRM靶向定量蛋白质组学项目

定量蛋白质组学技术:定量蛋白质组学是蛋白质组研究的重要内容,通过对基因表达产物——蛋白质的定量分析,以了解基因在不同的生理、病理和逆境条件下的表达情况。近年来,随着非凝胶技术的发展,蛋白质组学(“Shotgun”proteomics)技术,特别是多维蛋白质鉴定(MultidimensionalProteinIdentification,MudPIT)已成为研究复杂生物样本中大规模蛋白质表达和定性和定量分析的强有力工具。蛋白质组学在医学的研究应用:蛋白质组学是研究细胞、组织或生物体中蛋白质组成、定位、变化及其相互作用规律的科学。南京PRM靶向定量蛋白质组学项目

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