靶向代谢组学的一般分析流程为:1. 数据采集 第1步是得到标准品。如果无法从市场上买到,就必须定制合成。然后通过优化产物离子碰撞能量以得到的信号,再通过测定三重串联四极杆测定代谢物的 MRM 跃迁值。2. 定量 接下来用定量分析软件对 MRM 数据进行处理,得到报告。3. 统计分析和解释 将定量报告输入统计分析软件包,用统计工具,如ANOVA,对数据进行处理。靶向分析:在基于质谱的代谢组学分析中,要意识到离子强度和色谱保留时间都会随着时间的推移而产生漂移,所以在实验中,要按随机顺序对样本进行检测,且数据需要在同天同一批次进行采集,以减少误差。非靶向代谢组学(Untargeted metabolomics)即非目标代谢组学或发现代谢组学。南京动物靶向代谢组学应用
靶向代谢组学分析成功的关键因素是准确度、高通量和可靠性。靶向代谢组学鉴定一般采用 GC/MS 系统的选择性离子监测 (SIM),或在三重串联四极杆 LC/MS 系统上用多反应离子监测 (MRM) 进行靶向 MS/MS。SIM 比全扫描图谱采集具有更高的灵敏度,在单四极杆质谱中,这种灵敏度增强的原因是延长了所选择离子的采集时间。因为监测的是一个很小的质量窗口,所以质量色谱图只表示对极为特定质量的检测。在大多数情况下,灵敏度可以提高 10 倍。MRM 是进行质谱定量的选择方法,与 SIM 相比更为灵敏、更加特异。可以产生独特的碎片离子,可对非常复杂基质中的目标化合物进行监测和定量。河南GC-MS非靶向代谢组学分析靶向代谢组学着重对于设定好的目标代谢物进行定性、量检测分析和研究。
靶向代谢组学:靶向代谢组学(Targeted Metabolomics)是代谢组学研究的重要组成部分,也是全代谢组研究的延伸与拓展。相对于全代谢组分析而言,靶向代谢组分析具有特异性强,检测灵敏度高和定量准确等几个特点。通过对血液、尿液或其他体液以及组织中某一特定的代谢物的富集与准确定量定性分析,一方面可以结合其它实验数据揭示相关的分子生物学作用机制,另一方面,也可以为后续代谢分子标志物的深入研究和开发利用提供有力支持。靶向代谢组学可以用于:验证有非靶向代谢组学实验提出的假说;进行基于假说的探索性实验,针对特定代谢物,研究代谢模型。
药物代谢和代谢组学区别:代谢组学与药物代谢不同是它关注的对象不是外源性的药物而是生物体本身就有的内源性代谢物。这些代谢物是糖,脂肪,蛋白质,核酸,胆汁酸等等代谢得到的。还有共生菌代谢的,是一个庞大的混合物。目的是通过样本的对比,发现潜在标志物,指导疾病早期诊断甚至基因水平的研究。而药物代谢的目标是只要只要追踪到这种药物分子在体内变化就好,相当具有靶向性,因此使用的技术手段就是LC-MS。检测药物的中间体,和具体的药效,药代动的效应。代谢组学关注的对象是分子量在1000以下的小分子化合物。
代谢组学样品收集方法及所需样本量是什么?(1) 血清样品: 避免反复冻融。血液收集在离心管中静置30分钟进行凝血。8000rpm离心10分钟,取上清分装到冻存管中,放置液氮中或-80度冻存;单个样本要求体积为50μL。(2) 尿液样品:临床样本请全部取清晨第1次尿液。尿液直接分装到离心管中,8000rpm离心10分钟,取上清分装到冻存管中,放置液氮中或-80度冻存,-80度冻存;单个样本要求体积为100μL。(3) 其他样本收集办法请咨询谱领工作人员。代谢组学是继基因组学和蛋白质组学之后新近发展起来的一门学科。河南GC-MS非靶向代谢组学分析
较低的费用,是促使代谢组学在临床上易于接受的另一个原因。南京动物靶向代谢组学应用
代谢组学的研究对象与层次有哪些?一般来说,代谢组学关注的对象是分子量在1000以下的小分子化合物。根据研究的对象和目的不同,科学家将生物体系的代谢产物分析分为4个层次:代谢物靶标分析:某一个或几个特定组分的定性和定量分析,如某一类结构、性质相关的化合物(氨基酸、有机酸、顺二醇类)或者某一代谢途径的所有中间产物或多条代谢途径的标志性组分。代谢物指纹分析:同时对多个代谢物进行分析,不分离鉴定具体单一组分。代谢轮廓分析:限定条件下对生物体内特定组织内的代谢产物的快速定性和半定量分析。代谢组分析:对生物体或体内某一特定组织所包含的所有代谢物的定量分析,并研究该代谢物组在外界干预或病理生理条件下的动态变化规律。南京动物靶向代谢组学应用
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