转录组学的概念：转录组是指特定组织或细胞在某一发育阶段或功能状态下转录出来的所有RNA的汇合，包括蛋白质编码的信使RNA和非编码RNA（rRNA、tRNA和其他ncRNAs），高通量测序技术也被称为下一代测序（NGS）技术，推进了基因组学的研究进展。该项新技术除了研究静态基因组，近年来也开始应用于动态转录分析，由此衍生的技术称为RNA序列分析（RNA-seq）随着DNA基因芯片技术的快速发展，开创了这个病症近十年的高通量转录组研究。RNA-Seq技术可以从转录水平检测瘤中的改变基因。通过相关软件分析，鉴定相关改变基因在瘤发生的发展中所起的作用。然后经过刷选，进一步挑选出相关靶基因进行实验研究，有望为瘤的基因医治提供新的靶点。转录组学可应用于基因点突变及多态性检测。山东高通量转录组学分析

单细胞转录组学基本概念：普通转录组的思路也可以应用到单细胞转录组。普通转录组相当于把一群细胞混合到一起去提取RNA，获得的是每个细胞中RNA表达量的平均值。单细胞是把每个细胞单独分出来去提取RNA，然后建库测序，获得是是单个细胞的表达值。在每个细胞里面基因的表达具有随机性，且存在异质性。而且这些细胞群中会存在不同类型的细胞，尤其是当我们对整个组织进行测序时，它们本身就是由不同类型的细胞组成的，而我们用普通转录组来测序，相当于掩盖住了这些不同的细胞类型的差异，展示的是整个组织的平均的状态，所以说单细胞从这个来看跟普通转录组就不同在是用一个细胞测，不是用一堆细胞测。贵州宏转录学组分析转录组学测序包括mRNA和非编码RNA。

全转录组测序为什么需要构建两个文库？全转录组测序需要构建2个测序文库，一个小RNA文库和一个去除核糖体RNA的链特异性文库，然后分别上机测序。小RNA长度较短，一般小于50nt，采用测序策略为50SE。其他三类RNA序列一般大于200，通常在1000以上，可达几万，通过片段化构建150PE测序文库。然后小RNA文库可以获得miRNA序列信息，去核糖体的链特异性文库可以获得mRNA、lncRNA和circRNA的序列信息。转录组学即特定细胞在某一功能状态下转录出来的所有RNA的总和，包括mRNA和非编码RNA。

转录组学为什么原核物种只能做有参转录组分析？由于原核生物的基因组中存在大量基因重叠区域、操纵子及多顺反子，如果按照无参转录组分析策略进行组装的话，难度较大，组装结果存在较大风险。转录组学差异基因数目多少比较合理？不同的处理，不同的研究目标，差异基因的数目是不同的，从几十个到几千个都有可能。但是如果差异基因数目是个位数或者上万，那么就需要和分析人员沟通一下，查一查是否有问题。转录组学差异基因太多，注释信息太杂乱，怎么挑选目标基因？对不同的差异组合进行维恩图分析，挑选共有或者特有的差异基因作为后续的研究对象；根据前人的文献报道，挑选相关差异基因，不要局限在自己研究的物种上。转录组学测序比其他研究方法有哪些优势?

转录组学技术路线及研究意义：转录组测序的研究对象为特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA的总和，包括mRNA和非编码RNA。相对于传统的芯片杂交平台，转录组测序无需预先针对已知序列设计探针，即可对任意物种的整体转录活动进行检测，提供更准确的数字化信号，更高的检测通量以及更普遍的检测范围，是目前深入研究转录组复杂性的强大工具。基于高通量测序平台的转录组测序技术能够全方面获得物种特定组织的转录本信息，从而进行基因表达水平研究、新转录本发现研究、转录本结构变异研究等。转录组学可以直接测定每个转录本单核苷酸分辨率的准确度。贵州宏转录学组分析

转录组学检测范围广，高于6个数量级的动态检测范围。山东高通量转录组学分析

单细胞转录组学技术：10×genomics技术：首先在凝胶微珠上种上特定的DNA的片段，DNA的片段由三部分组成：Barcode、UMI、PolyT组成。Barcode是16个碱基的长度。一共有400万种Barcode，一个微珠是对应于一种Barcode，通过这400万种Barcode，可以把凝胶微珠给区分开（通过barcode可以把cell分开）。UMI是一段随机序列，也就是说每一个DNA分子，都有自己的UMI序列（一个微珠上有很多种UMI，通过UMI可以把RNA分子分开，并可以标记RNA分子的数量）。10个碱基长的UMI，有100万种序列的变化（4^10=1,048,576），UMI的作用是为了区分哪些reads是来自于一个原始cDNA分子区分基因片段重复还是duplication及区分是真实的SNP位点还是PCR产生的突变。通过10×genomics仪器将单个细胞与单个凝胶微珠通过油相混在一起，形成油包水的小微滴。山东高通量转录组学分析

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