LC-MS非靶向代谢组学:LCMS非靶向是通过液质联用(LC–MS)方法检测生物体受扰动或刺激前后大量代谢产物的动态变化,从中找出表达差异的代谢物,进而阐明生物体代谢相关过程的代谢组学技术。LCMS非靶向代谢组学适用于分析难挥发或热稳定性差的代谢产物,具有高通量、高分辨率、高灵敏度的特点。超高压液相色谱或超高效液相色谱(UPLC)通过采用更小粒径的色谱填料配合更高的压力,实现了更好的分离,具体包括更高的分离能力、更快的分离速度以及更好的灵敏度;串联质谱仪在MS扫描模式下,可实现高低碰撞能量快速切换,同时采集代谢物的一二级质谱信息,结合代谢组学数据处理软件对质谱信息的解析,在单次分析中可检测和鉴定几百至几千种代谢物。与基因组学和蛋白质组学相比,代谢组学与生理学的联系更加紧密。贵州靶向代谢组学应用
代谢组学介绍:通过液质联用(LC-MS)方法检测生物体受外界刺激前后体内大多数小分子代谢物的动态变化,重点寻找在实验组和对照组中有明显变化的代谢物,进而研究这些代谢物与生理病理变化的相关关系,其研究对象大多是分子量1500Da以内的小分子物质。技术优势:较高的灵敏度、分辨率;较宽的动态范围;适合对标本中未知代谢物的探索研究;适合于生物样本中复杂代谢产物的检测和潜在标志物的鉴定。代谢组学应用方向: 土壤代谢组学。研究土壤中有机质及土壤微生物代谢含量变化及相互作用,了解土壤微生物多样性及其碳代谢能力,为探索调节、控制和改善土壤环境质量提供重要的参考。湖北非靶向代谢组学研究方法什么是非靶向代谢组学、靶向代谢组学?
代谢组学需要多少的生物学重复?生物学重复指的是相同处理的相同类型的生物样本的数量(如相同剂量给药后2小时的小鼠采集并且相同储存条件和处理方法血清样本)。相较于基因和蛋白,代谢物处于生命活动的下游,收到环境和遗传背景等因素影响较大,生物学重复少可能会放大组内差异对于整体差异的影响,进而影响结果(如准确和足够多的找出生物标志物)。因此根据不同的生物类型,需要不同的生物学重复来增加数据的可靠性和说服力。代谢组学的研究方法与蛋白质组学的方法类似。
代谢组学的研究对象与层次有哪些?一般来说,代谢组学关注的对象是分子量在1000以下的小分子化合物。根据研究的对象和目的不同,科学家将生物体系的代谢产物分析分为4个层次:代谢物靶标分析:某一个或几个特定组分的定性和定量分析,如某一类结构、性质相关的化合物(氨基酸、有机酸、顺二醇类)或者某一代谢途径的所有中间产物或多条代谢途径的标志性组分。代谢物指纹分析:同时对多个代谢物进行分析,不分离鉴定具体单一组分。代谢轮廓分析:限定条件下对生物体内特定组织内的代谢产物的快速定性和半定量分析。代谢组分析:对生物体或体内某一特定组织所包含的所有代谢物的定量分析,并研究该代谢物组在外界干预或病理生理条件下的动态变化规律。代谢组学可以检测的样品种类有哪些?
代谢组学细胞样本收集:悬浮细胞:1)连同培养基转移到1.5 mL的进口离心管中。2)低速离心5 min(低于3000 rpm),使细胞沉淀于离心管的底部(1*107个细胞为宜)。3)倒掉培养基(尽量倒干净),用预冷的PBS反复冲洗2 ~ 3次,低速离心5 min,弃上清。4)标记离心管,将离心管的尖的一端插入液氮中,淬灭细胞沉淀1 min,-80 ℃冻存,干冰寄送。注意事项:1. 培养基倾倒时尽量倒干净,可使用滤纸将残留培养液吸净;2. 甲醇/水请使用色谱纯及以上规格;3. 液氮淬灭细胞时,请小心避免离心管破碎导致样本受损;4. 建议细胞样本在进行培养时多准备样本,以备后续使用。较低的费用,是促使代谢组学在临床上易于接受的另一个原因。湖北非靶向代谢组学研究方法
代谢组学可与生物表型变化建立直接相关性。贵州靶向代谢组学应用
代谢组学的研究分为靶向和非靶向。通俗说就是你有没有目标分子。传统代谢组学研究利用的是GC-MS,因为代谢物大多数都不是高沸点的,而且GC-MS有庞大的数据库检索。然后发展的LC-MS差不多,就是克服了一些高沸点物质难以检测的弊端。NMR用于代谢组学不是很多,一方面是NMR这个东西入行起点有点高,另一方面是样品太复杂而且灵敏度不高。但是NMR样品处理简单,无损。不需要各种衍生化。而且NMR对于物质结构的指认要比MS更精确(比如异构体)因此对定性非常有用,成为非靶向代谢组学的重要方法。贵州靶向代谢组学应用
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