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四川泛素化修饰蛋白质组学费用

来源: 发布时间:2022-01-09

蛋白质磷酸化修饰定义?在哺乳动物细胞生命周期中,大约有1/3的蛋白质发生过磷酸化修饰,在脊椎动物基因中,约有5%的基因编码的蛋白质是参与磷酸化和去磷酸化过程的蛋白激酶和磷酸酶。它可以通过激发、调节诸多信号通路进而参与调控生物体的生长、发育、逆境应激、疾病发生等多种生命过程,一直是生物学研究的重点与热点。蛋白磷酸化是指在激酶催化作用下把ATP或者GTP的磷酸基团(P04)转移到不同种类的氨基酸上(主要包括丝氨酸S、苏氨酸T、酪氨酸Y),从而使蛋白质发生翻译后修饰的过程。在细胞中,乙酰化修饰的反应由乙酰基转移酶所催化,将乙酰辅酶A的乙酰基转移并添加在蛋白质赖氨酸残基上。四川泛素化修饰蛋白质组学费用

蛋白质乙酰化修饰组学定量分析:1. SILAC细胞标记,组织/细胞破碎,提取、提纯目的蛋白质(基于SILAC的乙酰化修饰组学定量)。2. 使用胰蛋白酶将目的蛋白酶解成多肽片段。3. 对多肽片段进行iTRAQ标记(基于iTRAQ的乙酰化修饰组学定量)。4. 使用高效特异性乙酰化抗体对乙酰化修饰肽段进行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS对富集的乙酰化肽段进行序列分析。6. 数据分析,比对不同样本中蛋白乙酰化修饰水平差异,并对产生变化的生物学意义进行解释。江苏蛋白质丙二酰化修饰组学分析研究蛋白质的翻译后修饰调控着底物的酶活性、功能以及三级结构的变化。

蛋白质磷酸化修饰鉴定方法: Mn2+-Phos-tag SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳:Mn2+-Phos-tag SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳通过连接在丙烯酰胺分子上的双核金属(如Mn2+)配合物对磷酸基团的亲和,造成磷酸化蛋白迁移的滞留,再将电泳结果转移到PVDF膜上,用相应蛋白的抗体识别,根据迁移滞留检测蛋白磷酸化。技术优势特点:1、无放射危害。2、鉴定不受限于特异性识别蛋白质磷酸化的抗体。3、适用于大规模磷酸化蛋白分析。4、与质谱鉴定兼容,进行更为精细的分析鉴定。

翻译后修饰蛋白的检测方法:翻译后修饰蛋白的检测技术包括有免疫沉淀、western blot、质谱技术、体外生化分析等。其中,免疫沉淀是大多数翻译后修饰检测中的关键步骤,它利用蛋白特异性抗体或某种翻译后修饰的特异性抗体来富集目标蛋白,之后再用western blot或质谱技术分析目标蛋白。Western blot和质谱技术均可用于蛋白质翻译后修饰的下游检测,其中Western blot相对简单但依赖于特异性抗体且无法识别单个蛋白质变化,质谱则可以检测包括未知PTM在内的几乎所有的PTMs但成本更高需要专业知识来分析产生的大量数据。研究人员可以根据成本、有无可用抗体,以及有没有目标等选择合适的方法进行检测。各种蛋白质翻译后修饰在信号通路和网络中发挥着重要的作用。

质谱分析蛋白翻译后修饰:相对于蛋白质印迹等技术,质谱技术能更有效的对蛋白质的翻译后修饰进行分析,且可以对常规的Western blot 翻译后修饰蛋白鉴定进行补充。质谱分析蛋白翻译后修饰一般使用自下而上的基于肽段的方法。但是自下而上的质谱方法无法保证可以完全识别目的蛋白的特定翻译后修饰,因为质谱是通过蛋白质序列内的多个肽段来鉴定的,这很大程度上降低了翻译后修饰肽段被识别的机会。一种提高质谱仪检测到修饰肽段数量的策略是使用PTM亲和试剂进行肽段富集,而不是使用PTM亲和试剂进行蛋白富集,这将减少富集的未修饰肽段的数量。常见的蛋白质翻译后修饰包括糖基化。江苏蛋白质丙二酰化修饰组学分析研究

蛋白质翻译后修饰可以改变蛋白质的物理、化学性质。四川泛素化修饰蛋白质组学费用

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