蛋白组学研究怎么做？PRM:平行反应监测(ParallelReactionMonitoring)是一种基于高分辨、高精度质谱的离子监视技术，能够对目标蛋白质、目标肽段（如发生翻译后修饰的肽段）进行选择性检测，从而实现对目标蛋白质/肽段进行一定定量，因此也被称之为基于液相色谱质谱联用技术的WesternBlot（LC-MSMSbasedWesternBlot,L-WB）。PRM技术基于Q-Orbitrap为表示的高分辨、高精度质谱平台，首先利用四级杆质量分析器的选择能力，用Q1选择目标肽段的母离子，随后在Collisioncell中对母离子进行碎裂，之后利用Orbitrap分析器在二级质谱中检测所选择的母离子窗口内的所有碎片信息。这样即可对复杂样本中的目标蛋白质/肽段进行准确地特异性分析。蛋白质组学技术有电喷雾质谱。湖北外泌体蛋白质组学研究

定量蛋白质组学方法学介绍：Label-free：Label-free定量，即非标记的定量蛋白质组学，不需要对比较样本做特定标记处理，只需要比较特定肽段/蛋白在不同样品间的色谱质谱响应信号便可得到样品间蛋白表达量的变化，通常用于分析大规模蛋白鉴定和定量时所产生的质谱数据。Label-free定量不需要标记处理，操作简单，可以做任意样本的总蛋白质差异定量，但对实验操作的稳定性、重复性要求较高，准确性也较标记定量差。因此，Label-free技术适合于大样本量的定量比较，以及对无法用标记定量实现的实验设计。武汉定量蛋白组学分析研究蛋白质组的概念指由一个基因组，或一个细胞、组织表达的所有蛋白质。

我们究竟怎么研究蛋白质组学呢？目前高通量检测蛋白质的方法中，还是首推基于质谱的方法，纳流液相可以将复杂样品中的肽段高效地分离，然后依次进入质谱，对每个被离子化的肽段及其碎裂后碎片的荷质比进行分析，从而得到该肽段的序列信息，然后根据对应的色谱峰面积或者报告离子强度等信息，我们又可以得到该肽段的定量信息。蛋白组学研究怎么做？当下蛋白组学研究中应用比较普遍的技术是同位素标记定量（iTRAQ/TMT技术）。iTRAQ/TMT技术是利用DDA扫描模式，其扫描的方式是将一级质谱信号比较强的Top20的多肽进行二级打碎，然后进入二级质谱进行检测。其优势是二级谱图采集的肽段信息都来源于同一条多肽，有利于后续的定性分析。

蛋白质组学在医学的研究应用：蛋白质组学(Proteomics)是研究细胞、组织或生物体中蛋白质组成、定位、变化及其相互作用规律的科学，包括对蛋白质表达模式和蛋白质组功能模式的研究。蛋白质组学的发展对寻找疾病的诊断标志、筛选药物靶点、毒理学研究等有重要意义，也因此被普遍应用于医学研究。蛋白质组学研究，总体可分为一下几个步骤：（1）差异筛选（Discovery）（2）初步验证（Verification）（3）然后确诊（Validation）。基于质谱的蛋白质组学是目前比较主流的高通量蛋白质研究手段，当前在医疗健康方面的应用主要集中于基础研究和转化医学。近两年来蛋白质组研究技术已被应用到各种生命科学领域，如细胞生物学、神经生物学等。

蛋白质组学主要以全蛋白组（组织、细胞）、线粒体蛋白组、叶绿体蛋白组和外泌体蛋白组为研究对象，通过对蛋白组进行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析，揭示生物学功能、作用机制、疾病诊断的标志物以及预测蛋白的上、下游变化关系。蛋白质组学可以克服核酸水平预测的不确定性、反映核酸翻译后修饰情况。常用技术：非靶向蛋白组学：蛋白质定性（胶条鉴定和溶液鉴定），高通量定量蛋白组（Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量），多肽组学。蛋白质组学技术有飞行时间质谱。浙江PRM靶向定量蛋白质组学

蛋白质组学的研究方法将出现多种技术并存。湖北外泌体蛋白质组学研究

蛋白质组学是以蛋白质组为研究对象，研究细胞、组织或生物体蛋白质组成及其变化规律的科学。蛋白质组学研究不只是探索生命奥秘的必须工作，也能为人类健康事业带来巨大的利益，是生命科学进入后基因时代的特征。蛋白质是生命存在和运动的物质基础，是细胞增殖、分化、衰老和凋亡等重大生命活动的执行者，亦是基因功能活动的执行者，是生命现象复杂性和多变性的直接体现者。蛋白质组研究是为了识别及鉴定一个细胞或组织所表达的全部蛋白质以及它们的表达模式，是对基因组研究的重要补充，是对生物体在蛋白质水平上定量、动态、整体性的研究。这类研究有助于了解蛋白的结构、细胞的功能、生命的本质及活动规律，为疾病的诊断、诊疗、疫苗及新药开发提供科学依据。湖北外泌体蛋白质组学研究

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