蛋白组学样本要求:常规组织:(心、肝、脾、肺、肾、肠、脑、肌肉等)PBS洗涤去除残留血液和污染物,剔除无关的干扰组织(血管、脂肪、结缔组织等);冲洗干净,用组织剪或手术刀将组织分离成1cm3左右的小块;液氮速冻5min,保存于-80℃。软骨组织:PBS洗涤去除残留血液和污染物;用手术刀将软骨切成1cm3左右的小块;液氮速冻5min,保存于-80℃。软体动物(吸虫等)PBS洗涤去除来自宿主的污染;液氮速冻5min,保存于-80℃。蛋白质组的研究不但能为生命活动规律提供物质基础,也能为众多种疾病机理的阐明及攻克提供理论根据和解决途径。在未来的发展中,蛋白质组学的研究领域将更加普遍。湖北医学蛋白质组学领域
蛋白质组学概念:蛋白质组学(英语:proteomics,又译作蛋白质体学),是以蛋白质组为研究对象,研究细胞、组织或生物体蛋白质组成及其变化规律的科学。蛋白质组(Proteome)一词,源于蛋白质(protein)与基因组(genome)两个词的组合,意指“一种基因组所表达的全套蛋白质”,即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。蛋白质组学本质上指的是在大规模水平上研究蛋白质的特征,包括蛋白质的表达水平,翻译后的修饰,蛋白与蛋白相互作用等,由此获得蛋白质水平上的关于疾病发生,细胞代谢等过程的整体而全方面的认识。四川PRM定量蛋白质组学项目蛋白质组学的研究是生命科学进入后基因时代的特征。
蛋白质组学,指对某一基因组所表达的所有蛋白质及其特征进行大规模、系统化地研究,以期望在蛋白质水平上解释控制复杂的生命活动的分子网络。研究的内容主要包括:组成蛋白质一级结构氨基酸的序列特征、蛋白质的丰度、蛋白质活性、蛋白质的修饰、亚细胞定位和三维结构、蛋白质之间的相互作用以及对蛋白质的高阶复合物结构。质谱技术的发展为这些研究提供了有力的技术支撑,使得许多有实际应用的蛋白质组功能研究成为可能,包括翻译后修饰的整体分析,蛋白质相互作用网络的重建和模式生物蛋白表达谱的定量研究;在临床医学和转化医学研究中也越来越多地应用到蛋白质组学技术。
蛋白质组学在生物学领域的研究中的应用是怎样的?研究对象涉及到生物体且生物体内表达蛋白,理论上都可以应用蛋白质组学。蛋白质组学是以研究生物体蛋白组成及其变化规律为目的的应用科学。主要使用的仪器为液质联用高分辨率质谱仪。详细来说,蛋白质组学包含许多分支:非标定量蛋白质组学(定性研究生物体的蛋白组成),定量蛋白质组学(对生物体蛋白表达含量进行测定),修饰蛋白质组学(对蛋白质翻译后修饰进行检测)及相互作用蛋白质组研究(蛋白质直接相互作用机制解析)等。蛋白质组学属于后基因组时代的科学研究,针对基因表达产物进行检测与定量。因此更能反应出生物体生理条件下的水平与状态。蛋白质组学将成为寻找疾病分子标记和药物靶标比较有效的方法之一。
蛋白质组学技术:生物质谱:生物质谱技术是蛋白质组学研究中比较重要的鉴定技术,其基本原理是样品分子离子化后,根据不同离子之间的荷质比(M/E)的差异来分离并确定分子量。对于经过双向电泳分离的目标蛋白质用胰蛋白酶酶解(水解Lys或Arg的-C端形成的肽键)成肽段,对这些肽段用质谱进行鉴定与分析。目前常用的质谱包括两种:基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾质谱(ESI-MS)。蛋白质组的研究不但能为生命活动规律提供物质基础,也能为众多种疾病机理的阐明及攻克提供理论根据和解决途径。通过对正常个体及病理个体间的蛋白质组比较分析,我们可以找到某些“疾病特异性的蛋白质分子”。杭州DIA定量蛋白质组学检测多少钱
蛋白质组学技术并带领生物技术取得关键性的突破。湖北医学蛋白质组学领域
非标定量法(Label-free)是通过比较质谱分析次数或质谱峰强度,分析不同来源样品蛋白的数量变化,认为肽段在质谱中被捕获检测的频率与其在混合物中的丰度成正相关,因此蛋白质被质谱检测的计数反映了蛋白质的丰度,通过适当的数学公式可以将质谱检测计数与蛋白质的量联系起来,从而对蛋白质进行定量。按照其原理主要分为两种,第1种spectrumcounts类的非标记方法,发展比较早,已经形成多种定量算法,但是主要的原理都是以MS2的鉴定结果为定量基础,各种方法的差别在于后期算法在大规模数据上的修正。第二种非标记定量的原理是以MS1为基础,计算每个肽段的信号强度在LC-MS上的积分。湖北医学蛋白质组学领域
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