单细胞转录组学技术：Anydeplete技术首先通过随机引物进行一链合成，一链合成引入核苷酸类似物，用于酶切打断，二链合成同样引入核苷酸类似物用于保证链特异性。然后两端加上接头，接头一条链也带有核苷酸类似物，用于酶切降解。当形成单链文库后，设计特异性引物与rRNA形成文库结合，一轮退火延伸，rRNA文库形成双链结构。Reverseadaptor上带有特异的酶切位点，当形成双链结构酶切位点被识别，切去接头，这样rRNA形成的文库不带有完整的接头，而其他文库带有完整接头，通过PCR扩增富积既能得到想要的信息，包含mRNA及LncRNA信息。同样Anydeplete技术与10×genomics技术一样，包含分子标签，可分析duplication及PCR产生突变位点。转录组学可应用于炎症发生机制的发现及干预。贵阳外泌体microRNA转录组学质谱鉴定

转录组学测序比其他研究方法有哪些优势?转录组学测序具有以下优势：（1）可以直接测定每个转录本片段序列、单核苷酸分辨率的准确度，同时不存在传统微阵列杂交的荧光模拟信号带来的交叉反应和背景噪音问题；（2）灵敏度高，可以检测细胞中少至几个拷贝的稀有转录本；（3）可以对任意物种进行全基因组分析，无需预先设计特异性探针，因此无需了解物种基因信息，能够直接对任何物种进行转录组分析，同时能够检测未知基因，发现新的转录本，并准确地识别可变剪切位点及cSNP，UTR区域。（4）检测范围广，高于6个数量级的动态检测范围，能够同时鉴定和定量稀有转录本和正常转录本。江苏宏转录学组定性分析转录组具有空间特异性的特点。

单细胞转录组学技术：10×genomics技术：首先在凝胶微珠上种上特定的DNA的片段，DNA的片段由三部分组成：Barcode、UMI、PolyT组成。Barcode是16个碱基的长度。一共有400万种Barcode，一个微珠是对应于一种Barcode，通过这400万种Barcode，可以把凝胶微珠给区分开（通过barcode可以把cell分开）。UMI是一段随机序列，也就是说每一个DNA分子，都有自己的UMI序列（一个微珠上有很多种UMI，通过UMI可以把RNA分子分开，并可以标记RNA分子的数量）。10个碱基长的UMI，有100万种序列的变化（4^10=1,048,576），UMI的作用是为了区分哪些reads是来自于一个原始cDNA分子区分基因片段重复还是duplication及区分是真实的SNP位点还是PCR产生的突变。通过10×genomics仪器将单个细胞与单个凝胶微珠通过油相混在一起，形成油包水的小微滴。

单细胞RNA-seq转录组学工作流程：单细胞RNA测序等高通量单细胞转录组学技术通常从针对不同瘤和组织类型（解离、分选和分离细胞等）量身定制的实验工作流程开始，然后产生可以比对的序列，量化、质量控制(QC)过滤和以不同方式标准化，以实现许多下游计算分析，例如聚类分析以识别转录不同的细胞类型和亚群，等位基因分析以识别单核苷酸变异（SNV，用星号表示）或拷贝数变体（CNV）、轨迹分析、剪接检测或瘤的微环境（TME）相互作用的推断中。单细胞转录组学数据的分析通常因精心设计的研究设计而变得复杂，这些设计可能包括来自患病和未患病个体的样本、在不同时间点（例如，诊疗前和诊疗后）收集的同一个人的多个样本，或来自表现出不同疾病状态的不同个体的多个样本。这样的研究设计可以发现患者共享的转录特征，这些特征可能定义疾病中常见的干扰分子途径。转录组学能准确地识别可变剪切位点及cSNP，UTR区域。

全转录组测序为什么需要构建两个文库？全转录组测序需要构建2个测序文库，一个小RNA文库和一个去除核糖体RNA的链特异性文库，然后分别上机测序。小RNA长度较短，一般小于50nt，采用测序策略为50SE。其他三类RNA序列一般大于200，通常在1000以上，可达几万，通过片段化构建150PE测序文库。然后小RNA文库可以获得miRNA序列信息，去核糖体的链特异性文库可以获得mRNA、lncRNA和circRNA的序列信息。转录组学即特定细胞在某一功能状态下转录出来的所有RNA的总和，包括mRNA和非编码RNA。转录组学有高通量、更精确的数字信号。上海RNA转录组学研究内容

转录组学测序必须做生物学重复么？贵阳外泌体microRNA转录组学质谱鉴定

RNA-Seq转录组学的应用：RNA-Seq即对转录组进行测序和分析。一般来说在研究所会委托公司测序得到数据自己进行后续的生信分析（质控，mapping，差异基因表达分析，SNV分析等）。RNA-Seq有着巨大的应用前景。在不同背景下比较mRNA水平同一物种，不同组织：研究基因在不同部分的表达情况。同一物种，同一组织：研究基因在不同处理下，不同条件下的表达变化。同一组织，不同物种：研究基因的进化关系。时间序列实验：基因在不同时期的表达情况与发育的关系?；蚍掷啵赫业较赴匾?，疾病相关，处理相关的基因表达模式，用于诊断疾病和预测等?；蛲绾屯罚夯蛟谙赴疃械墓δ埽蚣涞南嗷プ饔谩９笱敉饷谔錷icroRNA转录组学质谱鉴定

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