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四川mRNA-seq转录组学方法

来源: 发布时间:2021-12-24

转录组学和基因组学目前有实用价值吗?二者实用价值非常大,尤其是对有瘤的患者的医治,简直颠覆了传统医治的模式。转录组和基因组月在生物学研究中有着重要价值。例如研究某个基因功能的时候,可以构建该基因的敲除或者过表达生物,然后对比野生型进行转录组分析看看该基因涉及什么表达网络。此外在医学方面的应用也很大,例如在有的瘤病人中进行基因组学测序和分析能够了解其中的发生的发展的驱动基因,然后能根据发展的驱动基因研究靶向药物,从而推动瘤的药物研发和医治!转录组学能够检测未知基因,发现新的转录本。四川mRNA-seq转录组学方法

转录组学技术:转录组学(transcriptomics),是一门在整体水平上研究细胞中基因转录的情况及转录调控规律的学科。简而言之,转录组学是从RNA水平研究基因表达的情况。转录组即一个活细胞所能转录出来的所有RNA的总和,是研究细胞表型和功能的一个重要手段。优势:高通量、更精确的数字信号;在单核苷酸水平对任意物种的整体转录活动进行检测;分析转录本的结构和表达水平的同时,还能发现未知转录本和稀有转录本;准确地识别可变剪切和融合基因。应用方向:植物生长机制的发现及干预;炎症发生机制的发现及干预;表达差异的研究;基因点突变及多态性检测。山东外泌体microRNA转录组学定性分析基于高通量测序平台的转录组学测序技术能够全方面获得物种特定组织的转录本信息。

全转录组测序:狭义的转录组默认只包含mRNA,但是广义的转录组指的是细胞或组织中所有转录产物的汇合,其中包含mRNA和非编码RNA(non-codingRNA,ncRNA)。非编码RNA目前的研究多集中在具有调控功能的smallRNA(以miRNA为表示),长链非编码RNA(longnon-codingRNA,lncRNA)和环状RNA(circularRNA,circRNA)上,而这几类ncRNA的调控对象都和mRNA有关。因此,全转录组即包含了ncRNAs和mRNA。全转录组测序即对以上四种ncRNA进行测序,并分析这四者之间复杂的相互作用关系。

转录组学为什么原核物种只能做有参转录组分析?由于原核生物的基因组中存在大量基因重叠区域、操纵子及多顺反子,如果按照无参转录组分析策略进行组装的话,难度较大,组装结果存在较大风险。转录组学差异基因数目多少比较合理?不同的处理,不同的研究目标,差异基因的数目是不同的,从几十个到几千个都有可能。但是如果差异基因数目是个位数或者上万,那么就需要和分析人员沟通一下,查一查是否有问题。转录组学差异基因太多,注释信息太杂乱,怎么挑选目标基因?对不同的差异组合进行维恩图分析,挑选共有或者特有的差异基因作为后续的研究对象;根据前人的文献报道,挑选相关差异基因,不要局限在自己研究的物种上。转录组学分析转录本的结构和表达水平的同时,还能发现未知转录本和稀有转录本。

单细胞转录组关键步骤:单细胞的分离和捕获:温和分离,稀有细胞。转录本的捕获和扩增:RNA测序需要0.1-1.0ugtotalRNA,捕获效率10%(5-**NA测序需要1ngDNA,极限稀释加移液分离单细胞;显微操作分选单细胞;流式分选带有表面Marker的单细胞;激光切割实体组织;微流控技术;磁珠捕获,主要用于CTC。它的一个优点是可以结合流式细胞荧光分选(FACS,fluorescentactivatedcellsorting)根据表面Marker分选细胞。因此特别适合分选细胞子集用于测序。它的另一个优点是可以获得细胞形态全览图,提供另外一个维度的信息,可用于鉴定微孔中是否有损伤的细胞或双份细胞,主要缺点是通量低且每个细胞所需的工作量相当大。转录组学测序样品纯度要求,电泳检测28S:18S至少大于1.8。山东外泌体microRNA转录组学定性分析

转录组学能够同时鉴定和定量稀有转录本和正常转录本。四川mRNA-seq转录组学方法

转录组及转录组测序(RNA-seq):转录组即特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA的总和,包括mRNA和非编码RNA。转录组测序(RNA-seq)主要通过高通量测序研究特定组织或细胞在某个时期转录出来的mRNA的表达量,进而对相关基因和表型的关系进行分析。本质上讲RNA-seq就是在用一种新的方法实现“基因决定性状”的经典思路。在RNA-seq之前用于研究基因组表达分析的主要技术是基因芯片,不过由于高通量测序成本的下降,RNA-seq的运用愈来愈普遍。四川mRNA-seq转录组学方法

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