乙酰化修饰蛋白组学实验流程：1）组织/细胞破碎，提取蛋白质；2）蛋白酶解成多肽片段；3）对多肽片段进行 iTRAQ 标记；4）高效特异性乙酰化抗体富集乙酰化修饰肽段；5）使用 LC-MS/MS 对富集的乙酰化肽段进行序列分析；5）数据分析，比对不同样本中蛋白乙酰化修饰水平差异，并对产生变化的生物学意义进行解释。乙酰化是一个普遍而重要的蛋白质翻译后修饰，不仅集中在对细胞染色体结构的影响以及对核内转录调控因子方面，而且还影响参与细胞周期和新陈代谢、肌动蛋白聚合控制及多聚谷氨酰胺疾病等方方面面。乙酰化不仅存在于真核细胞中，而且越来越多的证据也表明乙酰化同样影响许多原核细胞的生理生化过程。蛋白质翻译后修饰 (PTMs) 进一步促进了从基因组水平到蛋白质组复杂性的增加。四川泛素化修饰蛋白质组学领域

泛素化修饰蛋白组学研究：泛素化修饰蛋白组学是一种重要的翻译后修饰。泛素-蛋白酶体系统介导了真核生物体内80%~85%的蛋白质降解。此外，泛素化修饰还可以直接影响蛋白质的活性和定位，调控包括细胞周期、细胞凋亡、转录调控、DNA 损伤修复以及免疫应答等在内的多种细胞活动。由于翻译后修饰的蛋白质在生物样本中含量低、动态范围广，质谱分析前需要对修饰进行富集以提高其丰度，然后利用传统的定量蛋白组分析手段对富集得到的泛素化肽段样品进行定量分析。杭州乙酰化修饰蛋白质组学类型质谱可以用于已知和未知的翻译后修饰检测。

泛素化修饰蛋白质组学样品要求：1、动物组织的样品量湿重不少于200mg。2、植物细菌、噬菌体等微生物类样品量湿重不少于2g。3、富含杂质或蛋白质含量低的样品量湿重不少于5g；如植物的根，木质部、韧皮部组织等。4、体液类（唾液、羊水、脑脊液等）10mL以上，要保证不能溶血；血清要求500μl以上；尿液要求50mL以上。5、如直接提供蛋白质提取物，浓度不少于2 mg/mL，总量不少于1 mg。为保证实验效果，请尽量告知缓冲液成分，如是否有硫脲、SDS、强离子盐等等。另样品中应不含核酸、脂类、多糖等影响分离效果的成分。6、在细胞器蛋白质组学方面，提取细胞器或亚细胞器后，蛋白沉淀量在1 mg以上。

翻译后修饰蛋白组分析：蛋白质翻译后修饰是影响蛋白质功能并调节整个细胞过程的重要方式，几乎在每个细胞过程中都是不可或缺的。分析和鉴定翻译后修饰蛋白质对揭示蛋白质的功能和深入了解各种生理现象具有重要意义。大多数翻译后修饰蛋白以低化学计量和丰度存在，这限制了在分析全细胞裂解液时对其的检测。蛋白质是各种细胞功能比较重要的执行者，其功能正常与否决定着生命活动能否有序、高效的进行，而其中翻译后修饰起着至关重要的作用。翻译后修饰改变了蛋白质中不同氨基酸残基上的生物化学官能团，进而改变其化学性质或结构，使得蛋白质具有更为复杂的结构和更为完善的功能，实现更为精细的调节。蛋白质的翻译后修饰过程极其复杂，已知的翻译后修饰种类有20多种。但其中较为常见的主要是磷酸化、泛素化、SUMO化、酰(含乙酰)化、甲基化以及糖基化。在有机体内，磷酸化是蛋白翻译后修饰中比较普遍的共价修饰形式。

泛素化修饰蛋白组学研究分析样品要求：1. 如果您提供的是组织样品，请您干冰将组织样品寄给我们；植物组织样本大于400mg，血液样品至少2ml(血浆注意用EDTA防凝)，血清2ml，尿液10ml，动物组织样品至少2g，细胞样品为1X10^8个细胞，酵母、微生物等干重400mg。2. 如果您提供的是蛋白样品，请您保证蛋白总量在2-5mg；蛋白提取时使用普通的组织、细胞裂解液即可。3. 样品运输：请使用足量的干冰运输，并且尽量选用较快的邮递方式，以降低运输过程中样品降解的可能性。4. 在正式实验之前，我们都会对您提供的样品进行检测，检测合格后开始正式试验。泛素化修饰还可以直接影响蛋白质的活性和定位。浙江蛋白质乙酰化修饰组学领域

蛋白质翻译后修饰在蛋白质中磷酸化位点分析时应该注意些什么问题？四川泛素化修饰蛋白质组学领域

蛋白质翻译后修饰加入的官能团反应有：1、乙酰化——通常于蛋白质的N末端加入乙酰。2、烷基化——加入如甲基或乙基等烷基。3、甲基化——烷基化中常见的一种，在赖氨酸、精氨酸等的侧链氨基上加入甲基。4、生物素化——用生物素附加物令保存的赖氨酸酰化。5、谷氨酸化——在谷氨酸与导管素及其他蛋白质之间建立共价键。6、甘氨酸化——在一个至超过40种甘氨酸与导管素的C末端建立共价键。7、糖化——将糖基加入天冬酰胺、羟离氨酸、丝氨酸或苏氨酸，形成糖蛋白。8、异戊二烯化——加入如法呢醇及四异戊二烯等异戊二烯。9、硫辛酸化——附着硫辛酸的功能性。四川泛素化修饰蛋白质组学领域