什么是代谢组学?代谢组学是用来解决什么问题的?代谢组学(Metabonomics/Metabolomics)是发展起来的一门新兴学科,是研究关于生物体被扰动后(如基因的改变或环境变化后)其代谢产物(内源性代谢物质)种类、数量及其变化规律的科学。代谢组学着重研究的是生物整体或组织的内源性代谢物质的代谢途径及其所受内在或者外在因素的影响及随时间变化的规律。代谢组学通过揭示内在和外在因素影响下代谢整体的变化轨迹来反映某种病理生理过程中所发生的一系列生物事件。代谢组学主要研究的是作为各种代谢路径的底物和产物的小分子代谢物(分子量<1000)。贵州农学靶向代谢组学方法
代谢组学样本收集注意事项:(1)血液离开动物或人体后,应尽快开展血清、血浆的分离,并严格按照操作说明进行。(2)采集到的血清为黄色透明液体、血浆为淡黄色半透明液体,如果发现样本中是红色,说明在已经发生了了溶血现象,样本需重新制备。(3)血清与血浆的主要区别在于血清中不含纤维蛋白原。血清和血浆中脂质,氨基酸,核苷酸等代谢谱存在差别。粪便样本收集:1.人粪便:(1)用无菌勺挖取新鲜的,排泄中后部的内侧粪便(避免尿液及其他壁对样本污染);(2)分装样本20mg/管。(3)迅速放入液氮中冷冻处理至少15min.(4)-80℃冰箱冻存。寄样需足量干冰。广州LC-MS/MS非靶向脂质组学应用非靶向代谢组学是将生物体所有内源性代谢物作为研究目标。
LC-MS非靶向代谢组的优势有什么?1、定性分析结果可靠,可以同时给出每一个组分的分子量和丰富的结构信息;2、检测限低,MS具备高灵敏度,通过选择离子检测(SIM)方式,其检测能力还可以提高一个数量级以上;3、分析时间快,HPLC-MS使用的液相色谱柱为窄径柱,缩短了分析时间,提高了分离效果;4、自动化程度高,HPLC-MS具有高度的自动化。关于质谱,根据质谱的工作原理,质谱又分成了双聚焦质谱仪,四极杆质谱仪,飞行时间质谱仪,离子阱质谱仪,傅立叶变换质谱仪等不同种类。而在实验时,我们可以根据不同需要适当调整仪器组和以及仪器附件。
代谢组学发展前景:较低的费用,是促使代谢组学在临床上易于接受的另一个原因。与其他“组学”研究相比,代谢组学的费用更低,研究人员可以通过代谢组学研究筛检出代谢产物,然后采用更昂贵的基因组学和蛋白质组学的方法对有意义的代谢产物进一步加以研究。首先,必须识别出代谢产物,这并不是简单的工作。代谢组学研究比较大的挑战就在于对代谢产物的识别,这也是比较有趣的方面,而更具挑战性的工作,是进一步确认所有代谢物的功能。此外,质谱分析发现,代谢产物的同质性不高,由于缺乏均匀性,使色谱分析变得更加困难,无法识别出样品中的未知物质。代谢组学主要技术手段是质谱(MS)。
GC-MS非靶向代谢组学能检测到哪些类别的代谢物?衍生化极大地拓展了GC/MS的检测分析范围。GC/MS能检测到有机酸、氨基酸、单糖、糖醇、胺类、脂肪酸、吲哚、单甘油酯、核苷、二糖、生育酚、甾醇和胆汁酸等代谢物。如何提高定性准确度?GC/MS的定性有双重标准,一是保留指数,二是质谱信息的相似度(similarity)。不同于LC/MS的软电离源,GC/MS使用的EI源属于硬电离,能量较强且稳定,在将代谢物分子电离后,分子离子峰进一步碎裂产生丰富的碎片离子。因此,我们很难在GC/MS上看到分子离子峰。GC/MS提供的是代谢物的“指纹图谱”,将仪器得到的实际指纹图谱和质谱库(如NIST库)进行比对后,我们将会得到一个叫相似度的指标。保留指数和相似度都必须满足设定的阈值,软件才会给出色谱峰的定性结果。然后采用标准品质谱信息进行完全比对定性,也就是说只有经过标准品比对,代谢物才是被100%定性。LC-MS非靶向代谢组的优势有什么?广州LC-MS/MS非靶向脂质组学应用
代谢组学技术可应用于药物毒理学。贵州农学靶向代谢组学方法
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