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贵州泛素化修饰蛋白质组学主要方式

来源: 发布时间:2022-04-18

蛋白质乙酰化修饰组学技术服务:乙酰化修饰是体内高度保守的可逆转的蛋白修饰,对细胞核内转录调控因子的刺激有着非常重要的作用。此外,还存在大量的非组蛋白乙酰化修饰参与了代谢通路及代谢酶活性的调节。乙酰化修饰组学技术服务采用肽段预分离降低高丰度组蛋白对蛋白乙酰化鉴定的影响,再结合免疫共沉淀通过高效的抗体富集乙酰化的肽段,从而实现大规模乙酰化的鉴定及定量。蛋白质泛素化修饰组学技术服务:泛素化修饰是一种重要的翻译后修饰。泛素-蛋白酶体系统介导了真核生物体内80%~85%的蛋白质降解。此外,泛素化修饰还可以直接影响蛋白质的活性和定位,调控包括细胞周期、细胞凋亡、转录调控、DNA 损伤修复以及免疫应答等在内的多种细胞活动。蛋白质翻译后修饰是指对翻译后的蛋白质进行共价加工的过程。贵州泛素化修饰蛋白质组学主要方式

泛素化修饰蛋白质组技术原理:首先将蛋白样本酶解成肽段混合物,然后使用液相色谱对酶解后的肽段混合物进行组分分离以降低样本复杂程度,然后通过高质量的泛素化修饰类抗体和生物材料对修饰肽段进行富集,之后上样至液相色谱-串联质谱中进行分析定量。技术优势:1、高特异性的修饰类泛抗体;2、高分辨率、高灵敏度质谱仪;应用领域:泛素化修饰还参与了细胞周期、增殖、细胞凋亡、分化、转录调控、基因表达、转录调节、信号传递、损伤修复、炎症免疫等几乎一切生命活动的调控。泛素化心血管等疾病的发病密切相关。因此,作为近年来生物化学研究的一个重大成果,它已然成为研究、开发新药物的新靶点。江苏蛋白质棕榈酰化修饰组学方法蛋白质翻译后修饰PTMs通常包括磷酸化,糖基化,泛素化,亚硝基化,甲基化,乙酰化,脂质化和蛋白水解。

乙酰化修饰蛋白组学应用方向:1、乙酰化修饰与细胞基因表达调控、表观调控、细胞凋亡、细胞代谢、信号转导、蛋白质稳定性等生理过程研究。2、乙酰化引起的代谢疾病、代谢紊乱发生等疾病机理研究。乙酰化生物学意义:1、调节DNA-蛋白、蛋白-蛋白相互作用;2、与其他PTMs发生crosstalk;3、调节酶活性;4、调控蛋白亚细胞定位。生物领域各个研究方面,如:1、农林领域:抗逆胁迫机制,生长发育机制,育种保护研究等;2、 畜牧业:肉类及乳品质研究,致病机理研究等。

乙酰化修饰蛋白组学实验流程:1)组织/细胞破碎,提取蛋白质;2)蛋白酶解成多肽片段;3)对多肽片段进行 iTRAQ 标记;4)高效特异性乙酰化抗体富集乙酰化修饰肽段;5)使用 LC-MS/MS 对富集的乙酰化肽段进行序列分析;5)数据分析,比对不同样本中蛋白乙酰化修饰水平差异,并对产生变化的生物学意义进行解释。乙酰化是一个普遍而重要的蛋白质翻译后修饰,不仅集中在对细胞染色体结构的影响以及对核内转录调控因子方面,而且还影响参与细胞周期和新陈代谢、肌动蛋白聚合控制及多聚谷氨酰胺疾病等方方面面。乙酰化不仅存在于真核细胞中,而且越来越多的证据也表明乙酰化同样影响许多原核细胞的生理生化过程。蛋白质翻译后修饰的作用主要是改变蛋白质的定位。

甲基化修饰蛋白质组学技术应用领域:基础医学、临床诊断:生物标志物,疾病机理机制,疾病分型,个性化治理等;生物医药:药物作用机理,药效评价,药物开发等;农林领域:抗逆胁迫机制,生长发育机制,育种保护研究等;畜牧业:肉类及乳品质研究,致病机理研究等;微生物领域:致病机理,耐药机制,病原体-宿主相互作用研究等;海洋水产:渔业资源,海水养殖,渔业环境与水产品安全等。技术优势:采用抗体,特异性高;鉴定通量高, 一次可检测高可达上千个甲基化修饰位点。已知的蛋白质翻译后修饰种类有20多种。贵州蛋白质磷酸化修饰组学一般流程

蛋白质翻译后修饰是指蛋白质在翻译中或翻译后经历的一个共价加工过程。贵州泛素化修饰蛋白质组学主要方式

泛素化修饰蛋白质组学样品要求:1、动物组织的样品量湿重不少于200mg。2、植物细菌、噬菌体等微生物类样品量湿重不少于2g。3、富含杂质或蛋白质含量低的样品量湿重不少于5g;如植物的根,木质部、韧皮部组织等。4、体液类(唾液、羊水、脑脊液等)10mL以上,要保证不能溶血;血清要求500μl以上;尿液要求50mL以上。5、如直接提供蛋白质提取物,浓度不少于2 mg/mL,总量不少于1 mg。为保证实验效果,请尽量告知缓冲液成分,如是否有硫脲、SDS、强离子盐等等。另样品中应不含核酸、脂类、多糖等影响分离效果的成分。6、在细胞器蛋白质组学方面,提取细胞器或亚细胞器后,蛋白沉淀量在1 mg以上。贵州泛素化修饰蛋白质组学主要方式

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