琥珀酰化修饰蛋白质组技术特点:采用主流抗体亲和富集方法,特异性高,富集效率好;通过高分辨率、高扫描速度的质谱,对富集的琥珀酰化肽段进行大规模鉴定;结合常用的定量技术可对不同样品间的琥珀酰化水平差异进行定量比较。适用范围:药物作用靶点研究;疾病标志物筛选;植物胁迫/抗逆研究;作用机制研究;要求物种具有蛋白质参考数据库、EST序列(转录组)或基因组注释信息。应用方向:线粒体代谢、生物合成与代谢、中心代谢途径、炎症与疾病。蛋白质的翻译后修饰调控着底物的酶活性、功能以及三级结构的变化。武汉蛋白质亚硝基化修饰组学方法
蛋白质乙酰化修饰组学技术服务:乙酰化修饰是体内高度保守的可逆转的蛋白修饰,对细胞核内转录调控因子的刺激有着非常重要的作用。此外,还存在大量的非组蛋白乙酰化修饰参与了代谢通路及代谢酶活性的调节。乙酰化修饰组学技术服务采用肽段预分离降低高丰度组蛋白对蛋白乙酰化鉴定的影响,再结合免疫共沉淀通过高效的抗体富集乙酰化的肽段,从而实现大规模乙酰化的鉴定及定量。蛋白质泛素化修饰组学技术服务:泛素化修饰是一种重要的翻译后修饰。泛素-蛋白酶体系统介导了真核生物体内80%~85%的蛋白质降解。此外,泛素化修饰还可以直接影响蛋白质的活性和定位,调控包括细胞周期、细胞凋亡、转录调控、DNA 损伤修复以及免疫应答等在内的多种细胞活动。山东蛋白质翻译后修饰组学分析价格翻译后修饰可以发生在蛋白质生命周期的任何阶段。
磷酸化修饰蛋白质组学:磷酸化修饰蛋白质组的研究主要集中于真核生物中普遍存在的丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的磷酸化。由于体内磷酸化蛋白的含量很低,因此在分析前必须对其进行分离和富集。目前,常用的磷酸化蛋白质的分离和富集技术包括固定化金属亲和色谱、免疫沉淀、强阳离子交换色谱、强阴离子交换色谱、反相色谱等。这些技术被整合和优化用于不同生物样品的磷酸化蛋白质组分析。翻译后修饰分析自中而下分析策略:自中而下的蛋白质组学技术可用于组蛋白修饰的分析。样品制备与普遍使用的自下而上的分析策略相同,直到得到纯化的组蛋白。提取组蛋白后,用GluC进行消化。然后用弱阳离子交换/亲水相互作用色谱与配备电子转移解离(的高分辨率质谱联机联用,对样品进行理想的分离。谱识别可以用传统的软件进行,但是由于估计适当的错误发现率的问题,需要对结果进行过滤。
翻译后修饰蛋白组分析:蛋白质翻译后修饰(PTMs)是指蛋白质在翻译中或翻译后的化学修饰过程。蛋白质翻译后修饰(PTMs)通过给蛋白质添加磷酸酯、乙酸酯、酰胺基或甲基等官能团增加蛋白质组的功能多样性,并影响正常细胞生物学和发病机理的几乎所有方面。蛋白质翻译后修饰在许多细胞过程中起着关键作用,如细胞分化、蛋白质降解、信号传导和调节过程、基因表达调节以及蛋白质相互作用。蛋白质翻译后修饰PTMs通常包括磷酸化、糖基化、泛素化、亚硝基化、甲基化、乙酰化、脂质化和蛋白水解。因此,PTM的特征(包括修饰类别和修饰位点)在细胞生物学以及疾病诊断和预防研究中至关重要。蛋白质翻译后修饰组学自中而下的蛋白质组学技术可用于组蛋白修饰的分析。
蛋白质乙酰化修饰组学定量分析:1. SILAC细胞标记,组织/细胞破碎,提取、提纯目的蛋白质(基于SILAC的乙酰化修饰组学定量)。2. 使用胰蛋白酶将目的蛋白酶解成多肽片段。3. 对多肽片段进行iTRAQ标记(基于iTRAQ的乙酰化修饰组学定量)。4. 使用高效特异性乙酰化抗体对乙酰化修饰肽段进行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS对富集的乙酰化肽段进行序列分析。6. 数据分析,比对不同样本中蛋白乙酰化修饰水平差异,并对产生变化的生物学意义进行解释。目前,发现的比较常见的修饰类型是糖基化、泛素化和磷酸化。杭州蛋白质翻译后修饰组学研究
常见的蛋白质翻译后修饰包括泛素化。武汉蛋白质亚硝基化修饰组学方法
蛋白质磷酸化修饰组学技术:蛋白质的磷酸化修饰是生物体内重要的共价修饰方式之一。磷酸化修饰本身所具有的简单、灵活、可逆的特性,以及磷酸基团的供体ATP的易得性,使得磷酸化修饰被真核细胞所选择接受成为一种普遍的调控手段。蛋白质的磷酸化和去磷酸化这一可逆过程,几乎调节着包括细胞的增殖、发育、分化、细胞骨架调控、细胞凋亡、神经活动、肌肉收缩、新陈代谢发生等生命活动的过程,并且可逆的蛋白质磷酸化是目前所知道的主要的信号转导方式。目前已经知道有许多人类疾病是由于异常的磷酸化修饰所引起,而有些磷酸化修饰却是某种疾病所导致的后果。武汉蛋白质亚硝基化修饰组学方法