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浙江蛋白质丙二酰化修饰组学领域

来源: 发布时间:2022-04-10

乙酰化修饰蛋白组学应用方向有什么?1、基础医学、临床诊断:生物标志物,疾病机理机制,疾病分型,个性化治理等;2、生物医药:药物作用机理,药效评价,药物开发等;3、微生物领域:致病机理,耐药机制,病原体-宿主相互作用研究等;4、海洋水产:渔业资源,海水养殖,渔业环境与水产品安全等;5、生物能源、环境科学领域:发酵过程优化,生物燃料生产,环境危定风险评估研究等;6、食品营养:食品储藏及加工条件优化,食品组分及品质鉴定,功能性食品开发,食品安全监检测等。蛋白翻译后修饰方式的鉴定过程中,蛋白会首先被酶切成肽段,然后进入质谱进行分析。浙江蛋白质丙二酰化修饰组学领域

什么是蛋白质的翻译后修饰?蛋白质的翻译后修饰()是指蛋白质在翻译后的化学修饰。对于大部分的蛋白质来说,这是蛋白质生物合成的较后步骤。PTM是细胞信号传导中的重要组成部分。通过向修饰基团添加一个或多个氨基酸残基或通过蛋白质水解切割该基团来改变蛋白质的性质,是蛋白质生物学功能表达的重要步骤。生物蛋白质的翻译后修饰极大地增加了蛋白质结构的类型和功能。这个过程调节细胞周期和蛋白质转录,并影响表观遗传学。武汉泛素化修饰PRM定量验证已知的蛋白质翻译后修饰种类有20多种。

泛素化修饰蛋白组学研究:泛素化修饰蛋白组学是一种重要的翻译后修饰。泛素-蛋白酶体系统介导了真核生物体内80%~85%的蛋白质降解。此外,泛素化修饰还可以直接影响蛋白质的活性和定位,调控包括细胞周期、细胞凋亡、转录调控、DNA 损伤修复以及免疫应答等在内的多种细胞活动。由于翻译后修饰的蛋白质在生物样本中含量低、动态范围广,质谱分析前需要对修饰进行富集以提高其丰度,然后利用传统的定量蛋白组分析手段对富集得到的泛素化肽段样品进行定量分析。

蛋白磷酸化检测方法:一、Western Blot检测方法优势:1. WB方法简便,多数实验室具备Western Blot设备条件。2. 许多磷酸化抗体十分灵敏,能够检测低至10ug的蛋白样品。3. 对于丰度低的蛋白,可以先通过IP使用目标蛋白的抗体对目标蛋白进行富集,再进行WB检测被磷酸化的蛋白,检测效率可以提高几倍甚至几十倍。二、质谱检测方法:Western Blot的方法虽然简便,但是对于大规模分析复杂的生物样品的磷酸化水平就不再适用了。而质谱却能很好的解决这一问题。依靠高准确度质谱仪,如今快速准确分析细胞中高丰度蛋白的磷酸化修饰已是非常简单的事。具体的检测方法为先通过SDS-PAGE胶,或者2D-PAGE胶等分离目标蛋白,将含有目标蛋白的条带切下,胰酶消化,LC-MS/MS检测分析蛋白序列和相应位点的磷酸化修饰。这个方法适用于同时检测多个目标蛋白的磷酸化水平。蛋白质翻译后修饰的作用主要是改变蛋白质的功能。

蛋白质乙酰化修饰组学定量分析:1. SILAC细胞标记,组织/细胞破碎,提取、提纯目的蛋白质(基于SILAC的乙酰化修饰组学定量)。2. 使用胰蛋白酶将目的蛋白酶解成多肽片段。3. 对多肽片段进行iTRAQ标记(基于iTRAQ的乙酰化修饰组学定量)。4. 使用高效特异性乙酰化抗体对乙酰化修饰肽段进行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS对富集的乙酰化肽段进行序列分析。6. 数据分析,比对不同样本中蛋白乙酰化修饰水平差异,并对产生变化的生物学意义进行解释。蛋白质翻译后修饰组学磷酸化修饰具有灵活的特性。浙江蛋白质丙二酰化修饰组学领域

大多数翻译后修饰蛋白以低化学计量和丰度存在,这限制了在分析全细胞裂解液时对其的检测。浙江蛋白质丙二酰化修饰组学领域

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