质谱分析蛋白翻译后修饰:相对于蛋白质印迹等技术,质谱技术能更有效的对蛋白质的翻译后修饰进行分析,且可以对常规的Western blot 翻译后修饰蛋白鉴定进行补充。质谱分析蛋白翻译后修饰一般使用自下而上的基于肽段的方法。但是自下而上的质谱方法无法保证可以完全识别目的蛋白的特定翻译后修饰,因为质谱是通过蛋白质序列内的多个肽段来鉴定的,这很大程度上降低了翻译后修饰肽段被识别的机会。一种提高质谱仪检测到修饰肽段数量的策略是使用PTM亲和试剂进行肽段富集,而不是使用PTM亲和试剂进行蛋白富集,这将减少富集的未修饰肽段的数量。蛋白质乙酰化修饰,顾名思义指的就是在蛋白质原有基础上面嫁接上乙酰化基团。广东棕榈?;奘蔚鞍字首檠Х治鲅芯?/p>
蛋白质乙?;奘渭鞒蹋?. 组织/细胞破碎,提取、提纯目的蛋白质。2. 使用胰蛋白酶将目的蛋白酶解成多肽片段。3. 使用高效特异性乙?;固宥砸阴;奘坞亩谓忻庖吒患?. 使用LC-MS/MS对富集的乙?;亩谓屑ǚ治觥?. 数据分析,并对鉴定的乙?;坏愕纳镅Чδ芙薪馐驮げ狻K孀诺鞍字首檠芯康姆⒄梗颐窃嚼丛缴羁痰匾馐兜?,对于生物体生命活动的管理和调控过程,密切相关的不只是单个蛋白质层面的修饰状态,更重要的是研究蛋白质组学水平研究在翻译后修饰的动态变化。高质、高效的蛋白质翻译后修饰富集技术和丰富的、准确的定量手段使得研究蛋白质水平的翻译后修饰组学成为现实,借助这些组学研究手段能够实现不同生理病理状态下生物样本在翻译后修饰水平上的定量比较,深入地揭示翻译后修饰水平的波动与生物生命活动的密切联系。湖北蛋白质磷酸化修饰组学分析研究蛋白质糖基化指碳水化合物通过共翻译或翻译后修饰的方式附着到蛋白质上的过程。
蛋白质磷酸化修饰组学技术:蛋白质的磷酸化修饰是生物体内重要的共价修饰方式之一。磷酸化修饰本身所具有的简单、灵活、可逆的特性,以及磷酸基团的供体ATP的易得性,使得磷酸化修饰被真核细胞所选择接受成为一种普遍的调控手段。蛋白质的磷酸化和去磷酸化这一可逆过程,几乎调节着包括细胞的增殖、发育、分化、细胞骨架调控、细胞凋亡、神经活动、肌肉收缩、新陈代谢发生等生命活动的过程,并且可逆的蛋白质磷酸化是目前所知道的主要的信号转导方式。目前已经知道有许多人类疾病是由于异常的磷酸化修饰所引起,而有些磷酸化修饰却是某种疾病所导致的后果。
蛋白质磷酸化修饰组学:蛋白质的磷酸化修饰是生物体内重要的共价修饰方式之一。磷酸化修饰本身所具有的简单、灵活、可逆的特性,以及磷酸基团的供体ATP的易得性,使得磷酸化修饰被真核细胞所选择接受成为一种比较普遍的调控手段。蛋白质的磷酸化和去磷酸化这一可逆过程,几乎调节着包括细胞的增殖、发育、分化、细胞骨架调控、细胞凋亡、神经活动、肌肉收缩、新陈代谢发生等生命活动的所有过程,并且可逆的蛋白质磷酸化是目前所知道的比较主要的信号转导方式。目前已经知道有许多人类疾病是由于异常的磷酸化修饰所引起,而有些磷酸化修饰却是某种疾病所导致的后果。蛋白质翻译后修饰组学磷酸化修饰具有灵活的特性。
乙?;奘蔚鞍字首檠Х治觯阂阴;奘蔚鞍字首檠Х治鍪侵复拥鞍字首檠У乃椒治龅鞍字室阴;奘危ㄒ阴;鞍字实募ê投?。提供基于质谱的乙?;鞍鬃檠芯糠?。蛋白质乙酰化包括组蛋白乙?;头亲榈鞍滓阴;?。组蛋白乙酰化主要是赖氨酸乙?;?,已在基因转录调控作用方面被普遍的研究。非组蛋白乙?;钩闪瞬溉槎锵赴幸阴;鞍椎闹饕糠?,参与了所有主要生物过程,包括蛋白质的定位、转移、功能和降解,遗传物质的转录和复制等。除了重要的生物学功能以外,乙?;鞍字始捌涞骺孛富褂胨ダ虾投嘀旨膊。ㄈ缟窬湫挝陕摇⑿难芗膊〉龋┙裘芟喙?。因此,对乙酰化修饰蛋白质组进行研究有助于进一步探索细胞的生命活动与了解相关疾病的发病机制。质谱可以用于已知和未知的翻译后修饰检测。湖北蛋白质磷酸化修饰组学分析研究
在蛋白翻译后修饰方式的鉴定过程中,蛋白会首先被酶切成肽段,然后进入质谱进行分析。广东棕榈?;奘蔚鞍字首檠Х治鲅芯?/p>
质谱分析蛋白翻译后修饰原理:相较于没有发生翻译后修饰的蛋白,翻译后修饰蛋白会在特定肽段序列有分子量的增加。在蛋白翻译后修饰方式的质谱分析过程中,蛋白会首先被酶切成肽段,然后进入质谱进行分析;通过质谱分析,得到的是一系列肽段的相对分子质量信息。对于某一个特定的肽段而言,在没有发生任何翻译后修饰的情况下其序列信息和分子量是确定的,当它发生了某种翻译后修饰之后,例如磷酸化修饰,因为磷酸根的分子量也是确定的,所以在质谱检测过程中如果发现部分肽段的分子量刚好增加了一个磷酸根的分子量,则可以假设这个肽段发生了磷酸化修饰,再通过二级或多级质谱的谱图进行二次确认即可实现翻译后修饰类型鉴定及修饰位点分析等。广东棕榈?;奘蔚鞍字首檠Х治鲅芯?/p>