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四川LC-MS/MS非靶向代谢组学质谱分析

来源: 发布时间:2022-04-02

代谢组学如何控制临床样本的质量?对于临床的样本建议每组比较低的25个生物学重复,达到30例以上比较好。因为临床样本受外界环境和遗传背景影响较大,需要很多生物学重复来消除这些外在影响。此外,在样本收集过程中,应保持收养的时间段和操作程序尽可能一致。代谢组学样本收集取样基本原则:表示性和一致性:验组与对照组样本在取材部位、时间处理等方面尽可能保持一致,从而保证实验的可信度;迅速性:操作过程迅速,很大限度缩短样本采集到实验的时间;低温原则:所有样本离体后,分离步骤应在4℃或冰上进行,分离好的样本立即存于-80℃,以免样本产生进一步代谢活动。代谢组学主要技术手段是色谱(HPLC,GC)。四川LC-MS/MS非靶向代谢组学质谱分析

代谢组学疾病诊断应用:与基因组学和蛋白质组学相比, 代谢组学的研究侧重于相关特定组分的共性,是要涉及研究每一个代谢组分的共性、特性和规律,目前据此目标相距甚远。尽管充满了挑战,研究人员仍然坚信,与基因组学和蛋白质组学相比,代谢组学与生理学的联系更加紧密。疾病导致机体病理生理过程变化,引起代谢产物发生相应的改变,通过对某些代谢产物进行分析,并与 正常人的代谢产物比较,寻找疾病的生物标记物,将提供一种较好的疾病诊断方法。贵州脂质代谢组学多分析鉴定在食品安全领域,利用代谢组学工具发现农兽药等在动植物体内的相关生物标志物也是一个热点领域。

代谢组学发展前景:代谢组学是继基因组学、蛋白质组学、转录组学后出现的新兴“组学”,每年发表的代谢组学研究的文章数量都在不断增加。代谢组学的发展很迅速,尽管还没有经典论文出现,但是研究人员相信,与基因组学和蛋白质组学相比,代谢组学将在临床上发挥更大的作用。许多公司通过市场研究发现,健康人并不希望进行基因型分析,所以,对于这些人群来说,基因组学研究在临床上的应用很有限。而代谢组学与临床化学较为相似,且相对于基因组学来说,提供的个人信息更少,故其在临床上的应用有可能产生一定的影响。

代谢组学有哪些特点?(1) 代谢处于系统生物学的末端,更能反映基因与外部环境互作的真实情况,因此,在多数生物表型研究上更加适用。(2) 常规代谢组学只关注内源性化合物,也有使用代谢组学技术测定外源性化合物的。内源性化合物的上调和下调指示了与疾病、毒性、基因修饰或环境因子的影响。(3) 高通量定量和定性研究生物小分子化合物。(4) 内源性化合物的结果可以作为疾病的诊断、药物筛选或者其他分型评估等潜在生物标志物。谢组学通过揭示内在和外在因素影响下,生物体的代谢整体的变化轨迹来反映某种生理或病理的一系列发展过程。代谢组学是对某一生物或细胞中相对分子量小于1,000的小分子代谢产物进行定性和定量分析的一门新学科。

靶向代谢组学分析成功的关键因素是准确度、高通量和可靠性。靶向代谢组学鉴定一般采用 GC/MS 系统的选择性离子监测 (SIM),或在三重串联四极杆 LC/MS 系统上用多反应离子监测 (MRM) 进行靶向 MS/MS。SIM 比全扫描图谱采集具有更高的灵敏度,在单四极杆质谱中,这种灵敏度增强的原因是延长了所选择离子的采集时间。因为监测的是一个很小的质量窗口,所以质量色谱图只表示对极为特定质量的检测。在大多数情况下,灵敏度可以提高 10 倍。MRM 是进行质谱定量的选择方法,与 SIM 相比更为灵敏、更加特异。可以产生独特的碎片离子,可对非常复杂基质中的目标化合物进行监测和定量。代谢组学研究对象大都是相对分子质量1000以内的小分子物质。山东LC-MS/MS非靶向脂质组学分析

代谢组学 (metabolomics)的出现是生命科学研究的必然。四川LC-MS/MS非靶向代谢组学质谱分析

代谢组学样本收集指南:1.血浆样本收集:(1)从合适的静脉采集血液(典型10mL)到标记的肝素锂血浆收集管中(肝素锂用作抗凝剂)。(2)立即于4 °C离心(3000g)20min,上清液即为血浆。(3)离心完毕,取出血浆收集管,取上清液(血浆),分等份(0.5mL或0.1mL),转移到冻存管中(冰上),旋盖。(4)保存于-80℃冰箱。寄样需足量干冰。2.血清样本收集:(1)从合适的静脉采集血液(典型10mL)到血清收集管中。(2)将血清收集管冰水浴(4℃)凝集至少1h(2h以内),记录凝集时间。(3)将血清收集管放到冷冻离心机中低温(4℃)离心15min(2500 g)。(4)离心完毕,取出血清收集管,取上清液,分等份(0.5mL或0.1mL),转移到冻存管中(冰上),旋盖。(5)保存于-80℃冰箱。寄样需足量干冰。四川LC-MS/MS非靶向代谢组学质谱分析

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