转录组及转录组测序(RNA-seq):转录组即特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA的总和,包括mRNA和非编码RNA。转录组测序(RNA-seq)主要通过高通量测序研究特定组织或细胞在某个时期转录出来的mRNA的表达量,进而对相关基因和表型的关系进行分析。本质上讲RNA-seq就是在用一种新的方法实现“基因决定性状”的经典思路。在RNA-seq之前用于研究基因组表达分析的主要技术是基因芯片,不过由于高通量测序成本的下降,RNA-seq的运用愈来愈普遍。转录组学狭义上指所有mRNA的组合。浙江靶向转录组学
circRNA转录组学:是一类具有闭合环状结构的非编码RNA分子,没有5′帽子结构和3′poly(A)结构,主要位于细胞质或储存于外泌体中,不受RNA外切酶影响,表达更稳定且不易降解,已被证明普遍存在于多种真核生物体内[1]。大多数circRNA是由外显子环化而成,也有部分circRNA是由内含子环化而成的套索结构。同时由于circRNA含有大量的miRNA应答原件(MREs),能与AGO蛋白形成RNA诱导沉默复合体(RISC)的催化关键,然后导致circRNA降解。根据来源,circRNA可大致分为四类:全外显子型的circRNA,内含子和外显子组合的EIcircRNA,内含子组成的套索型ciRNA,由病毒RNA基因组、tRNA、rRNA、snRNA等环化产生的circRNA。北京全长转录学组研究内容RNA-Seq转录组学有着巨大的应用前景。
RNA-Seq转录组学的应用:RNA-Seq即对转录组进行测序和分析。一般来说在研究所会委托公司测序得到数据自己进行后续的生信分析(质控,mapping,差异基因表达分析,SNV分析等)。RNA-Seq有着巨大的应用前景。在不同背景下比较mRNA水平同一物种,不同组织:研究基因在不同部分的表达情况。同一物种,同一组织:研究基因在不同处理下,不同条件下的表达变化。同一组织,不同物种:研究基因的进化关系。时间序列实验:基因在不同时期的表达情况与发育的关系。基因分类:找到细胞特异,疾病相关,处理相关的基因表达模式,用于诊断疾病和预测等。基因网络和通路:基因在细胞活动中的功能,基因间的相互作用。
转录组学测序流程:1、样品RNA准备。2、测序文库构建。3、DNA成簇(Cluster)扩增。4、高通量测序(Illumina)。5、数据分析。转录组的分析大致有以下几种情况:1、同一物种在发育过程中的各时间节点的基因表达特点及存在的差异;2、不同品系之间存在的差异表达基因;3、不同的外界条件处理,如细菌、病毒、光照、紫外、干旱、高温、高盐胁迫,对基因表达的影响;4、同一个体,不同组织之间的基因表达差异。简而言之,转录组学是从RNA水平研究基因表达的情况。转录学组测序能够提供更高的检测通量。
普通转录组学测序适用于哪些情况?普通转录组测序主要适用于两大类:一是不同的生长阶段或者发育过程;二是不同的环境、药物、病原菌等逆境胁迫处理。转录组学测序必须做生物学重复么?需要几个重复?生物学重复是生物实验所必须的,转录组测序也不例外,至少3次生物学重复。准备生物重复样品时,通过对实验的预先设计和控制,尽可能将与实验处理无关的背景条件控制在同一水平,减少批次效应对结果的影响。转录组学测序可以同时测到mRNA、lncRNA、micRNA以及circRNA么?我们通常所讲的转录组测序只能测到mRNA。但是全转录组测序通过构建两个测序文库(一是小RNA测序文库、二是lncRNA测序文库)是可以测到以上4种RNA的。转录组学测序有什么样的样品要求?浙江靶向转录组学
转录组学可以直接测定每个转录本单核苷酸分辨率的准确度。浙江靶向转录组学
转录组学测序比其他研究方法有哪些优势?转录组学测序具有以下优势:(1)可以直接测定每个转录本片段序列、单核苷酸分辨率的准确度,同时不存在传统微阵列杂交的荧光模拟信号带来的交叉反应和背景噪音问题;(2)灵敏度高,可以检测细胞中少至几个拷贝的稀有转录本;(3)可以对任意物种进行全基因组分析,无需预先设计特异性探针,因此无需了解物种基因信息,能够直接对任何物种进行转录组分析,同时能够检测未知基因,发现新的转录本,并准确地识别可变剪切位点及cSNP,UTR区域。(4)检测范围广,高于6个数量级的动态检测范围,能够同时鉴定和定量稀有转录本和正常转录本。浙江靶向转录组学
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