定量蛋白质组学技术:定量蛋白质组学是蛋白质组研究的重要内容,通过对基因表达产物——蛋白质的定量分析,以了解基因在不同的生理、病理和逆境条件下的表达情况。近年来,随着非凝胶技术的发展,蛋白质组学(“Shotgun”proteomics)技术,特别是多维蛋白质鉴定(MultidimensionalProteinIdentification,MudPIT)已成为研究复杂生物样本中大规模蛋白质表达和定性和定量分析的强有力工具。蛋白质组学在医学的研究应用:蛋白质组学是研究细胞、组织或生物体中蛋白质组成、定位、变化及其相互作用规律的科学。蛋白质组的概念指由一个基因组,或一个细胞、组织表达的所有蛋白质。南京修饰蛋白组学质谱分析
蛋白组学技术:质谱技术相较于传统蛋白质鉴定技术而言,拥有灵敏、准确、高通量、自动化等特点。质谱鉴定蛋白质的基本原理是先将样品分子离子化,然后根据不同离子之间的质荷比差异来分离并确定蛋白质的相对分子质量。根据蛋白质酶解后所得到的肽质量指纹图谱、肽序列标签、和肽阶梯序列去检索蛋白质或核酸序列数据库,质谱技术可达到对蛋白质的快速鉴定和高通量筛选。因产生离子的方法不同而发展起来的质谱包括基质辅助激光解吸离子化质谱、电喷雾离子化质谱、表面增强激光解吸离子化质谱等。湖北定量蛋白组学质谱分析蛋白质组学技术有生物质谱。
蛋白组学研究怎么做?PRM:平行反应监测(ParallelReactionMonitoring)是一种基于高分辨、高精度质谱的离子监视技术,能够对目标蛋白质、目标肽段(如发生翻译后修饰的肽段)进行选择性检测,从而实现对目标蛋白质/肽段进行一定定量,因此也被称之为基于液相色谱质谱联用技术的WesternBlot(LC-MSMSbasedWesternBlot,L-WB)。PRM技术基于Q-Orbitrap为表示的高分辨、高精度质谱平台,首先利用四级杆质量分析器的选择能力,用Q1选择目标肽段的母离子,随后在Collisioncell中对母离子进行碎裂,之后利用Orbitrap分析器在二级质谱中检测所选择的母离子窗口内的所有碎片信息。这样即可对复杂样本中的目标蛋白质/肽段进行准确地特异性分析。
蛋白质组学研究这样做:蛋白质组与基因组相对应,也是一个整体的概念,随着基因组学研究的不断深入,蛋白质组学已逐渐成为研究热点,对蛋白组学的研究可以使我们更容易接近生命的机理本质,但探究成千上万的蛋白质特性也是一个重大的技术挑战。蛋白质组(Proteome)指的是某一时刻或某一状态基因组表达的所有相应的蛋白,即细胞、组织或机体全部蛋白质的存在及活动形式,其是一个动态概念,它是在组织、细胞的整体蛋白质水平上,探索蛋白质作用模式、功能机理、调节控制以及蛋白质群体内的相互关系、从而获得生命活动调控网络的全方面而深入的认识,以揭示生命活动的基本规律。定量蛋白质组学通过对蛋白质的定量分析,以了解基因在不同的生理、病理和逆境条件下的表达情况。
蛋白组学样本寄送前是否需要精确计数或是称量?不同样本寄送会有不同的送样要求,按照收集方法提供可以保证实验用量充足。不需要精确计数或是称量,项目开展前会进行蛋白浓度的测定,后续也是不同样本等蛋白量处理、上机检测,但是要保证每个样本的寄样量达到实验要求。常规定量蛋白组实验的主要步骤有哪些,数据分析内容包含哪些?实验步骤:首先获得生物学样本,然后进行蛋白提取,定量,SDS-PAGE跑胶质控,还原烷基化,酶解,获得肽段,(标记+分组分),上机检测,搜库软件搜库,数据分析;数据分析:主要分为基础数据分析、?级数据分析和个性化数据分析三个部分。基础分析主要包括差异表达蛋白筛选、层次聚类分析分析、COG注释分析、亚细胞定位分析、GO注释富集分析、KEGG注释分析、PPI分析等。蛋白质组研究技术在研究对象上,覆盖了原核微生物、真核微生物、植物和动物等范围。南京常规蛋白质组学项目
蛋白质组可以随着组织、甚至环境状态的不同而改变。南京修饰蛋白组学质谱分析
定量蛋白质组学分析(QuantitativeProteomics)是对一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂混合体系内所有蛋白质进行精确鉴定和定量。可用于筛选和寻找任何因素引起的样本之间的差异表达蛋白,结合生物信息学揭示细胞生理病理等功能,同时也可对某些关键蛋白进行定性和定量分析。目前定量蛋白质组学技术常见标记(Label)和非标记的(LabelFree)定量策略。定量蛋白质组学技术常见的几类主要包括:LabelFree定量蛋白组分析、SILAC与免疫共沉淀蛋白互作分析、MRM/PRM定量蛋白组学分析、SILAC/Dimethyl标记定量蛋白组分析、SWATH定量蛋白组学、TMT/iTRAQ/multinotch定量蛋白组学分析。南京修饰蛋白组学质谱分析
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