定量蛋白质组学分析(QuantitativeProteomics)是对一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂混合体系内所有蛋白质进行精确鉴定和定量。可用于筛选和寻找任何因素引起的样本之间的差异表达蛋白,结合生物信息学揭示细胞生理病理等功能,同时也可对某些关键蛋白进行定性和定量分析。目前定量蛋白质组学技术常见标记(Label)和非标记的(LabelFree)定量策略。定量蛋白质组学技术常见的几类主要包括:LabelFree定量蛋白组分析、SILAC与免疫共沉淀蛋白互作分析、MRM/PRM定量蛋白组学分析、SILAC/Dimethyl标记定量蛋白组分析、SWATH定量蛋白组学、TMT/iTRAQ/multinotch定量蛋白组学分析。蛋白质组学技术有生物质谱。广州定量乙酰化蛋白质组学分析方法
定量蛋白质组学的方法学背景和意义:从生命活动的直接执行者——蛋白质的角度研究生命现象和规律(特别是疾病防治和病理研究)已成为研究生命科学的主要手段。而这些研究往往离不开对细胞、组织中含有蛋白质种类和表达量的研究。对处不同时期、不同条件下蛋白质表达水平变化的研究,识别功能模块和路径,监控疾病的生物标志物,这些研究都需要对蛋白质进行鉴定和定量。生物质谱技术的出现和不断成熟为蛋白质差异表达分析提供了更可靠、动态范围更广的研究手段。基于质谱技术,科学家们不断开发出新的定量蛋白质组学方法,来了解细胞、组织或生物体的整体蛋白质动力学。广州定量乙酰化蛋白质组学技术蛋白质组学技术的本质(从分析化学角度来看),就是对蛋白质的定性定量分析。
我们究竟怎么研究蛋白质组学呢?目前高通量检测蛋白质的方法中,还是首推基于质谱的方法,纳流液相可以将复杂样品中的肽段高效地分离,然后依次进入质谱,对每个被离子化的肽段及其碎裂后碎片的荷质比进行分析,从而得到该肽段的序列信息,然后根据对应的色谱峰面积或者报告离子强度等信息,我们又可以得到该肽段的定量信息。蛋白组学研究怎么做?当下蛋白组学研究中应用比较普遍的技术是同位素标记定量(iTRAQ/TMT技术)。iTRAQ/TMT技术是利用DDA扫描模式,其扫描的方式是将一级质谱信号比较强的Top20的多肽进行二级打碎,然后进入二级质谱进行检测。其优势是二级谱图采集的肽段信息都来源于同一条多肽,有利于后续的定性分析。
蛋白质组学:质谱分析蛋白质组学的基本原理主要是通过测定被测样品离子的理化性质来进行分析,根据样品的质量谱图和相关信息从而得到定性和定量结果。目前,蛋白质组学质谱分析一般是根据保留时间(retentiontime)、质荷比(m/z)、离子强度(intensity)这三个维度对肽蛋白质进行鉴定和定量,即3D蛋白质组学。4D蛋白质组学在3D蛋白质组学的基础之上增加了第四维度,离子淌度(mobility),主要根据离子的形状和截面对离子进行分离,能够区分m/z差值非常小的肽段,使低丰度蛋白信号能够被区分和识别出来。4D蛋白质组学基于timsTOFPro质谱仪,结合PASEF(ParallelAccumulationSerialFragmentation,同步累积连续碎裂)与TIMS(TrappedIonMobilitySpectrometry,离子迁移谱),可重复测量所有检测离子的碰撞截面(CCS),能更快、更灵敏的进行蛋白质组定性和定量。蛋白质组学技术的发展已经成为现代的生物技术快速发展的重要支撑。
蛋白质组学是以蛋白质组为研究对象,研究细胞、组织或生物体蛋白质组成及其变化规律的科学。蛋白质组学研究不只是探索生命奥秘的必须工作,也能为人类健康事业带来巨大的利益,是生命科学进入后基因时代的特征。蛋白质是生命存在和运动的物质基础,是细胞增殖、分化、衰老和凋亡等重大生命活动的执行者,亦是基因功能活动的执行者,是生命现象复杂性和多变性的直接体现者。蛋白质组研究是为了识别及鉴定一个细胞或组织所表达的全部蛋白质以及它们的表达模式,是对基因组研究的重要补充,是对生物体在蛋白质水平上定量、动态、整体性的研究。这类研究有助于了解蛋白的结构、细胞的功能、生命的本质及活动规律,为疾病的诊断、诊疗、疫苗及新药开发提供科学依据。蛋白质组意指“一种基因组所表达的全套蛋白质”,即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。湖北新型修饰蛋白组学一般流程
蛋白质组学是以蛋白质组为研究对象,研究细胞、组织或生物体蛋白质组成及其变化规律的科学。广州定量乙酰化蛋白质组学分析方法
蛋白质组学,指对某一基因组所表达的所有蛋白质及其特征进行大规模、系统化地研究,以期望在蛋白质水平上解释控制复杂的生命活动的分子网络。研究的内容主要包括:组成蛋白质一级结构氨基酸的序列特征、蛋白质的丰度、蛋白质活性、蛋白质的修饰、亚细胞定位和三维结构、蛋白质之间的相互作用以及对蛋白质的高阶复合物结构。质谱技术的发展为这些研究提供了有力的技术支撑,使得许多有实际应用的蛋白质组功能研究成为可能,包括翻译后修饰的整体分析,蛋白质相互作用网络的重建和模式生物蛋白表达谱的定量研究;在临床医学和转化医学研究中也越来越多地应用到蛋白质组学技术。广州定量乙酰化蛋白质组学分析方法
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