转录组是特定发育阶段或生理条件下细胞内的完整转录信息的汇合,表示了基因表达的中间状态。转录组测序可以对所有转录物进行分类、确定基因的转录结构、量化转录物的表达水平。蛋白质是生命功能的直接执行者,蛋白组是一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。整合转录组学和蛋白质组学的表达数据对生物样本进行研究,可以从整体上解释生物学问题,探究生物体生理和疾病机理等。转录组学应用于胃肠瘤发生机制研究:利用转录组学可检测瘤细胞恶化过程中的RNA(编码RNA及非编码RNA)的变化,有助于更好地理解胃肠瘤的发生机制。转录组学是研究细胞表型和功能的一个重要手段。哈尔滨IncRNA转录组学应用
circRNA转录组学生物学功能:circRNA主要存在于细胞质或外泌体中,具有组织特异性、疾病特异性、时序特异性及高稳定性等特征。近几年,大量的研究表明circRNA在生物的生长发育、胁迫应答、疾病发生和发展等方面密切相关,并预测其在疾病诊断标记物等方面的应用前景,但其生物学功能在很大程度上仍然未知。目前认可度比较高的circRNA生物学功能。miRNAsponge。circRNA富含miRNA结合位点来充当miRNA海绵作用,阻止miRNA在3′非翻译区与mRNA相互作用,进而间接调控miRNA下游靶基因的表达。上海靶向转录组学领域转录组学可以准确地识别可变剪切和融合基因。
单细胞转录组学基本概念:普通转录组的思路也可以应用到单细胞转录组。普通转录组相当于把一群细胞混合到一起去提取RNA,获得的是每个细胞中RNA表达量的平均值。单细胞是把每个细胞单独分出来去提取RNA,然后建库测序,获得是是单个细胞的表达值。在每个细胞里面基因的表达具有随机性,且存在异质性。而且这些细胞群中会存在不同类型的细胞,尤其是当我们对整个组织进行测序时,它们本身就是由不同类型的细胞组成的,而我们用普通转录组来测序,相当于掩盖住了这些不同的细胞类型的差异,展示的是整个组织的平均的状态,所以说单细胞从这个来看跟普通转录组就不同在是用一个细胞测,不是用一堆细胞测。
RNA-Seq,是基于新一代测序技术的转录组学研究方法:首先提取生物样品的全部转录的RNA并进行mRNA富集,然后反转录为cDNA后进行的新一代高通量测序,在此基础上进行片段的拼接组装,从而可得到一个个的转录本,进而可以形成对该生物样品当前发育状态的基因表达状况的全局了解。不同阶段或部位的生物样品的RNA-Seq转录组进行比较分析,则可以在转录层面得到基因表达水平的变化,针对关键基因则可以进行代谢通路(Pathway)的构建。转录组学即特定细胞在某一功能状态下转录出来的所有RNA的总和,包括mRNA和非编码RNA。转录组学测序样品纯度要求,OD值应在1.8至2.2之间。
宏转录学组概念:宏转录组测序是对某一特定时期、特定环境样品中的全部微生物的RNA进行高通量测序,直接获得该环境中所有微生物转录组信息的一种测序技术的新应用。宏转录组中不只包含有微生物的物种信息,还有微生物的基因表达信息。如果说宏基因组能告诉我们微生物群,那么宏转录组则能告诉我们这些微生物,这有助于挖掘微生物功能基因和探索微生物与环境、疾病、动植物等关系的机制。宏转录组分析:从以G为单位的高通量测序数据中获取研究所需的微生物种类、基因、通路等信息是进行宏转录组研究必须经历的一步。现在网络上分析组学数据的工具五花八门。能否从众多组学工具中选择出适合分析宏转录组数据的软件,能否搭建一套完整、快速、高效、灵敏、高精确的宏转录组分析pipline,直接关乎到后期数据分析的进行。相对于传统的芯片杂交平台,转录学组测序无需预先针对已知序列设计探针。河南靶向转录组学定性分析
转录组学检测范围广,高于6个数量级的动态检测范围。哈尔滨IncRNA转录组学应用
单细胞转录组学技术:10×genomics技术:首先在凝胶微珠上种上特定的DNA的片段,DNA的片段由三部分组成:Barcode、UMI、PolyT组成。Barcode是16个碱基的长度。一共有400万种Barcode,一个微珠是对应于一种Barcode,通过这400万种Barcode,可以把凝胶微珠给区分开(通过barcode可以把cell分开)。UMI是一段随机序列,也就是说每一个DNA分子,都有自己的UMI序列(一个微珠上有很多种UMI,通过UMI可以把RNA分子分开,并可以标记RNA分子的数量)。10个碱基长的UMI,有100万种序列的变化(4^10=1,048,576),UMI的作用是为了区分哪些reads是来自于一个原始cDNA分子区分基因片段重复还是duplication及区分是真实的SNP位点还是PCR产生的突变。通过10×genomics仪器将单个细胞与单个凝胶微珠通过油相混在一起,形成油包水的小微滴。哈尔滨IncRNA转录组学应用
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