靶向代谢组学分析成功的关键因素是准确度、高通量和可靠性。靶向代谢组学鉴定一般采用 GC/MS 系统的选择性离子监测 (SIM),或在三重串联四极杆 LC/MS 系统上用多反应离子监测 (MRM) 进行靶向 MS/MS。SIM 比全扫描图谱采集具有更高的灵敏度,在单四极杆质谱中,这种灵敏度增强的原因是延长了所选择离子的采集时间。因为监测的是一个很小的质量窗口,所以质量色谱图只表示对极为特定质量的检测。在大多数情况下,灵敏度可以提高 10 倍。MRM 是进行质谱定量的选择方法,与 SIM 相比更为灵敏、更加特异??梢圆捞氐乃槠胱?,可对非常复杂基质中的目标化合物进行监测和定量。代谢组学先进分析检测技术结合模式识别和**系统等计算分析方法是代谢组学研究的基本方法。山东靶向代谢组学应用
代谢组学样本收集注意事项:(1)血液离开动物或人体后,应尽快开展血清、血浆的分离,并严格按照操作说明进行。(2)采集到的血清为黄色透明液体、血浆为淡黄色半透明液体,如果发现样本中是红色,说明在已经发生了了溶血现象,样本需重新制备。(3)血清与血浆的主要区别在于血清中不含纤维蛋白原。血清和血浆中脂质,氨基酸,核苷酸等代谢谱存在差别。粪便样本收集:1.人粪便:(1)用无菌勺挖取新鲜的,排泄中后部的内侧粪便(避免尿液及其他壁对样本污染);(2)分装样本20mg/管。(3)迅速放入液氮中冷冻处理至少15min.(4)-80℃冰箱冻存。寄样需足量干冰。山东靶向代谢组学应用代谢组学技术得到了迅速发展。
代谢组学(英语:metabolomics)是对细胞,生物流体,组织或生物体内的小分子(通常称为代谢物,metabolites)的大规模研究。 这些小分子及其在生物系统中的相互作用统称为代谢组。能够对生物样本中的代谢物进行全方面分析的一项新兴技术,被定义为代谢组学技术。代谢组学是在后基因组学时代兴起的一门跨领域学科,其主要目标是定量的研究生命体对外界刺激、病理生理变化、以及本身基因突变而产生的其体内代谢物水平的多元动态反应。之后得到迅速发展并渗透到多项领域,比如疾病诊断、医药研制开发、营养食品科学、毒理学、环境学,植物学等与人类健康护理密切相关的领域。
代谢组学样品收集方法及所需样本量是什么?(1) 血清样品: 避免反复冻融。血液收集在离心管中静置30分钟进行凝血。8000rpm离心10分钟,取上清分装到冻存管中,放置液氮中或-80度冻存;单个样本要求体积为50μL。(2) 尿液样品:临床样本请全部取清晨第1次尿液。尿液直接分装到离心管中,8000rpm离心10分钟,取上清分装到冻存管中,放置液氮中或-80度冻存,-80度冻存;单个样本要求体积为100μL。(3) 其他样本收集办法请咨询谱领工作人员。代谢组学的发展很迅速。
代谢组学发展前景:代谢组学是继基因组学、蛋白质组学、转录组学后出现的新兴“组学”,每年发表的代谢组学研究的文章数量都在不断增加。代谢组学的发展很迅速,尽管还没有经典论文出现,但是研究人员相信,与基因组学和蛋白质组学相比,代谢组学将在临床上发挥更大的作用。许多公司通过市场研究发现,健康人并不希望进行基因型分析,所以,对于这些人群来说,基因组学研究在临床上的应用很有限。而代谢组学与临床化学较为相似,且相对于基因组学来说,提供的个人信息更少,故其在临床上的应用有可能产生一定的影响。代谢组学是对某一生物或细胞中相对分子量小于1,000的小分子代谢产物进行定性和定量分析的一门新学科。杭州LC-MS/MS非靶向代谢组学技术服务
与其他“组学”研究相比,代谢组学的费用更低。山东靶向代谢组学应用
GC-MS非靶向代谢组学能检测到哪些类别的代谢物?衍生化极大地拓展了GC/MS的检测分析范围。GC/MS能检测到有机酸、氨基酸、单糖、糖醇、胺类、脂肪酸、吲哚、单甘油酯、核苷、二糖、生育酚、甾醇和胆汁酸等代谢物。如何提高定性准确度?GC/MS的定性有双重标准,一是保留指数,二是质谱信息的相似度(similarity)。不同于LC/MS的软电离源,GC/MS使用的EI源属于硬电离,能量较强且稳定,在将代谢物分子电离后,分子离子峰进一步碎裂产生丰富的碎片离子。因此,我们很难在GC/MS上看到分子离子峰。GC/MS提供的是代谢物的“指纹图谱”,将仪器得到的实际指纹图谱和质谱库(如NIST库)进行比对后,我们将会得到一个叫相似度的指标。保留指数和相似度都必须满足设定的阈值,软件才会给出色谱峰的定性结果。然后采用标准品质谱信息进行完全比对定性,也就是说只有经过标准品比对,代谢物才是被100%定性。山东靶向代谢组学应用
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