单细胞转录组学技术：10×genomics技术：首先在凝胶微珠上种上特定的DNA的片段，DNA的片段由三部分组成：Barcode、UMI、PolyT组成。Barcode是16个碱基的长度。一共有400万种Barcode，一个微珠是对应于一种Barcode，通过这400万种Barcode，可以把凝胶微珠给区分开（通过barcode可以把cell分开）。UMI是一段随机序列，也就是说每一个DNA分子，都有自己的UMI序列（一个微珠上有很多种UMI，通过UMI可以把RNA分子分开，并可以标记RNA分子的数量）。10个碱基长的UMI，有100万种序列的变化（4^10=1,048,576），UMI的作用是为了区分哪些reads是来自于一个原始cDNA分子区分基因片段重复还是duplication及区分是真实的SNP位点还是PCR产生的突变。通过10×genomics仪器将单个细胞与单个凝胶微珠通过油相混在一起，形成油包水的小微滴。转录组学无需预先设计特异性探针。外泌体转录组学质谱分析

单细胞RNA-seq转录组学工作流程：单细胞RNA测序等高通量单细胞转录组学技术通常从针对不同瘤和组织类型（解离、分选和分离细胞等）量身定制的实验工作流程开始，然后产生可以比对的序列，量化、质量控制(QC)过滤和以不同方式标准化，以实现许多下游计算分析，例如聚类分析以识别转录不同的细胞类型和亚群，等位基因分析以识别单核苷酸变异（SNV，用星号表示）或拷贝数变体（CNV）、轨迹分析、剪接检测或瘤的微环境（TME）相互作用的推断中。单细胞转录组学数据的分析通常因精心设计的研究设计而变得复杂，这些设计可能包括来自患病和未患病个体的样本、在不同时间点（例如，诊疗前和诊疗后）收集的同一个人的多个样本，或来自表现出不同疾病状态的不同个体的多个样本。这样的研究设计可以发现患者共享的转录特征，这些特征可能定义疾病中常见的干扰分子途径。哈尔滨外泌体microRNA转录组学服务相对于传统的芯片杂交平台，转录学组测序无需预先针对已知序列设计探针。

circRNA转录组学成环机制：circRNA环化方式分为内含子环化和外显子环化。目前主流的成环机制可归类为：依赖于剪切体的索尾插接环化。在mRNA前体上，通过连续的组装小核核糖体蛋白从而催化外显子下游的5′供体的位点连接到上游的3′受体的位点，索尾插接形成环化，然后通过剪切形成circRNA。顺式作用元件促进circRNA形成。部分circRNA外显子两侧的内含子中含有反向互补序列，首先在剪切位点上并排形成RNA双链体，再通过可变剪切形成带内含子和不带内含子两种不同的circRNA?；蛘咄庀宰幽诓恳约傲讲嗟哪诤涌梢跃赫蠷NA配对，然后通过可变剪切形成不同类型的circRNA。

转录组学技术路线及研究意义：转录组测序的研究对象为特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA的总和，包括mRNA和非编码RNA。相对于传统的芯片杂交平台，转录组测序无需预先针对已知序列设计探针，即可对任意物种的整体转录活动进行检测，提供更准确的数字化信号，更高的检测通量以及更普遍的检测范围，是目前深入研究转录组复杂性的强大工具。基于高通量测序平台的转录组测序技术能够全方面获得物种特定组织的转录本信息，从而进行基因表达水平研究、新转录本发现研究、转录本结构变异研究等。转录组学可以直接测定每个转录本片段序列。

转录组学测序比其他研究方法有哪些优势?转录组学测序具有以下优势：（1）可以直接测定每个转录本片段序列、单核苷酸分辨率的准确度，同时不存在传统微阵列杂交的荧光模拟信号带来的交叉反应和背景噪音问题；（2）灵敏度高，可以检测细胞中少至几个拷贝的稀有转录本；（3）可以对任意物种进行全基因组分析，无需预先设计特异性探针，因此无需了解物种基因信息，能够直接对任何物种进行转录组分析，同时能够检测未知基因，发现新的转录本，并准确地识别可变剪切位点及cSNP，UTR区域。（4）检测范围广，高于6个数量级的动态检测范围，能够同时鉴定和定量稀有转录本和正常转录本。RNA-Seq转录组学有着巨大的应用前景。北京外泌体microRNA转录组学研究方法

转录组学可以在单核苷酸水平对任意物种的整体转录活动进行检测。外泌体转录组学质谱分析

RNA-seq转录组学技术优势有：1、可以直接测定每个转录本片段序列、单核苷酸分辨率的准确度;2、灵敏度高，可以检测细胞中少至几个拷贝的稀有转录本;3、可以对任意物种进行全基因组分析，能够检测未知基因，发现新的转录本，并准确地识别可变剪切位点及cSNP，UTR区域;4、检测范围广，能够同时鉴定和定量稀有转录本和正常转录本。RNA-seq转录组学是需要生物学重复的，至少需要两次生物学重复，3次以上的生物学重复更好。以3个重复为例，加上对照的三个生物学重复，一次RNA-seq需要6个样本。外泌体转录组学质谱分析

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