蛋白质修饰位点分析:基于LC-MS/MS分析能够精确测定蛋白质或多肽分子质量这一特性,从而检测蛋白质或者多肽上位点发生何种修饰。可检测修饰类型如下: 磷酸化、糖基化、乙酰化、泛素化、丙酰化、丁酰化、丙二酰化、戊二酰化、琥珀酰化、单甲基化、二甲基化、三甲基化。1、磷酸化:信号转导、细胞周期、生长发育机理等;2、糖基化:蛋白质折叠、更新以及免疫应答等;3、乙酰化:基因表达调控、细胞凋亡、细胞代谢、蛋白质稳定性以及神经退行性的病变等;4、泛素化:细胞周期、细胞凋亡、转录调控、DNA修复以及信号转导等;5、甲基化:染色质结构及转录调控等;6、丙酰化 / 丙二酰化 / 戊二酰化 / 琥珀酰化:主要存在于线粒体和细菌中,与代谢过程密切相关。泛素化修饰是一种重要的翻译后修饰。深圳蛋白质氧化修饰组学主要方式
蛋白翻译后修饰检测:由于PTMs在基础生物学以及疾病发病机理中的重要性,因此非常需要对蛋白质的翻译后修饰进行检测。对蛋白翻译后修饰进行研究时通常需要富集步骤,因为这些翻译后修饰的蛋白质相对含量较低。大多数PTMs的检测方法与富集策略结合在一起开发,以提供比较好的机会来识别、验证和研究蛋白翻译后修饰的功能。但是,在检测已有特异性翻译后修饰抗体的修饰蛋白质时,可能不需要富集步骤。质谱技术,通过测定肽段的分子量可以对该肽段的翻译后修饰情况进行检测,并可以对翻译后修饰蛋白进行定性和定量分析。广州蛋白质甲基化修饰组学研究质谱可以用于已知和未知的翻译后修饰检测。
蛋白质磷酸化修饰鉴定方法:免疫印迹技术:技术优势特点。1、 检测特异性高。2、能够特异鉴定单个磷酸化位点。同位素标记(Isotope Labeled)结合免疫印迹法:此方法的原理是当蛋白发生磷酸化时,放射性32P的掺入和分子质量变化引起的凝胶迁移(gelshift),再通过免疫印迹方法检测同位素标记,从而达到鉴定磷酸化蛋白的目的。技术优势特点:1、检测技术灵敏并且直观。2、常用于体外磷酸化反应结果检测。3、 磷酸化鉴定不受抗体限制。4、可同时分析多个蛋白磷酸化。
翻译后修饰蛋白组学分析:蛋白质组学的研究的工作不只聚焦于细胞不同生长时期或是疾病条件下的蛋白质表达水平变化,许多至关重要的生命进程不只由蛋白质相对丰度控制,更重要的是被时空特异分布的、可逆的翻译后修饰所调控,因而揭示翻译后修饰发生规律是解析蛋白质复杂多样的生物功能的一个重要前提。蛋白质发生翻译后修饰时其分子质量会发生响应的改变,通过质谱能够精确测定蛋白质或多肽的分子质量。同时,发生翻译后修饰的蛋白质再样本中含量低且动态范围广,所以在质谱检测前需要对发生修饰的蛋白质或肽段进行富集。质谱是蛋白质翻译后修饰检测的常用技术之一。
翻译后修饰蛋白组分析:蛋白质翻译后修饰是影响蛋白质功能并调节整个细胞过程的重要方式,几乎在每个细胞过程中都是不可或缺的。分析和鉴定翻译后修饰蛋白质对揭示蛋白质的功能和深入了解各种生理现象具有重要意义。大多数翻译后修饰蛋白以低化学计量和丰度存在,这限制了在分析全细胞裂解液时对其的检测。因此,要在蛋白质组学的范围内表征翻译后修饰蛋白,纯化方法是必要的,以分离修饰蛋白和肽段,然后再进行后续分析。后续分析一般采用质谱技术进行,可以对翻译后修饰蛋白组进行定性和定量研究。蛋白质磷酸化修饰的免疫印迹技术优点:能够特异鉴定单个磷酸化位点。贵阳亚硝基化修饰蛋白质组学类型
泛素化修饰还可以直接影响蛋白质的活性和定位。深圳蛋白质氧化修饰组学主要方式
蛋白磷酸化检测方法:一、Western Blot检测方法优势:1. WB方法简便,多数实验室具备Western Blot设备条件。2. 许多磷酸化抗体十分灵敏,能够检测低至10ug的蛋白样品。3. 对于丰度低的蛋白,可以先通过IP使用目标蛋白的抗体对目标蛋白进行富集,再进行WB检测被磷酸化的蛋白,检测效率可以提高几倍甚至几十倍。二、质谱检测方法:Western Blot的方法虽然简便,但是对于大规模分析复杂的生物样品的磷酸化水平就不再适用了。而质谱却能很好的解决这一问题。依靠高准确度质谱仪,如今快速准确分析细胞中高丰度蛋白的磷酸化修饰已是非常简单的事。具体的检测方法为先通过SDS-PAGE胶,或者2D-PAGE胶等分离目标蛋白,将含有目标蛋白的条带切下,胰酶消化,LC-MS/MS检测分析蛋白序列和相应位点的磷酸化修饰。这个方法适用于同时检测多个目标蛋白的磷酸化水平。深圳蛋白质氧化修饰组学主要方式
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