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湖北常规蛋白质组学质谱分析

来源: 发布时间:2022-03-06

蛋白质组学发展趋势:1、基础研究方面:近两年来蛋白质组研究技术已被应用到各种生命科学领域,如细胞生物学、神经生物学等。在研究对象上,覆盖了原核微生物、真核微生物、植物和动物等范围,涉及到各种重要的生物学现象,如信号转导、细胞分化、蛋白质折叠等等。在未来的发展中,蛋白质组学的研究领域将更加普遍。2、应用研究方面:蛋白质组学将成为寻找疾病分子标记和药物靶标比较有效的方法之一。在对早老性痴呆等人类重大疾病的临床诊断和治理方面蛋白质组技术也有十分诱人的前景,目前国际上许多大型药物公司正投入大量的人力和物力进行蛋白质组学方面的应用性研究。蛋白质组学包括蛋白与蛋白相互作用等。湖北常规蛋白质组学质谱分析

蛋白质组学概念:蛋白质组学(英语:proteomics,又译作蛋白质体学),是以蛋白质组为研究对象,研究细胞、组织或生物体蛋白质组成及其变化规律的科学。蛋白质组(Proteome)一词,源于蛋白质(protein)与基因组(genome)两个词的组合,意指“一种基因组所表达的全套蛋白质”,即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。蛋白质组学本质上指的是在大规模水平上研究蛋白质的特征,包括蛋白质的表达水平,翻译后的修饰,蛋白与蛋白相互作用等,由此获得蛋白质水平上的关于疾病发生,细胞代谢等过程的整体而全方面的认识。河南蛋白质定量组学主要技术蛋白质组学技术有电喷雾质谱。

蛋白质组学在医疗和健康方面有什么应用?基于质谱的蛋白质组学是目前比较主流的高通量蛋白质研究手段,当前在医疗健康方面的应用主要集中于基础研究和转化医学。随着质谱、系统生物学、生物信息学等相关学科的发展,我认为今后我们会更多地在现实生活中见到蛋白质组学相关的应用。如定量胰岛素、鉴定血红蛋白氨基酸突变(镰刀形红细胞症)、糖化血红蛋白比例测定等。从测试体量估计,应该远小于1%的ELISA测试量。由于成本和通量等原因,蛋白质组学技术并不如ELISA适合大量的日常分析。但对于一些分析有问题的项目,采用基于质谱(或二维胶等手段)的蛋白质组学有独特的技术优势。另外,蛋白质组学方法开发和验证周期短,在中高级特殊应用(如极少使用的特殊蛋白指标临床检测、未知疾病研究和控制)中也有其独特优势。

定量蛋白质组学分析:特点:(1)不同样本标记之后混样,统一处理上机,减少了分别上机造成的实验误差,并利用同位素标签的丰度来检测,定量更准确,重复性更好;(2)由于需要标记试剂标记,因此成本相对较高;(3)通量高,在一次实验中比较多可同时比较8个样品;(4)利用基于同一个参考样品的办法,可以进行多于8个样品的定量比较;(5)iTRAQ的覆盖度高、灵敏度高。Label-Free定量蛋白质组学分析:Label-Free定量,即非标记的定量蛋白质组学,不需要对比较样本做特定标记处理,只需要比较特定肽段/蛋白在不同样品间的色谱质谱响应信号便可得到样品间蛋白表达量的变化,通常用于分析大规模蛋白鉴定和定量时所产生的质谱数据。定量蛋白质组学是蛋白质组研究的重要内容。

常规蛋白质组学:Labelfree多肽组学:顾名思义,就是不使用任何标记方法,直接对肽段进行质谱鉴定和定性定量分析。实验流程简单,只需要对蛋白进行常规酶解和除盐步骤即可上机。定量方式分为两种:峰面积(Peakintensity)和峰计数(Spectralcount),常用的是峰面积。不过,由于质谱采集时只选取topN的母离子进行二级碎裂和MS2检测,所以会丢失一些丰度较低的肽段信息,缺失值比较多。TMT/iTRAQ标记定量蛋白组学:TMT全称是TandemMassTag,是经典化学标记试剂,普遍用于差异表达蛋白质组分析研究中。该技术采用6重、10重或16重同位素标签,与肽段的氨基发生共价结合反应,可实现同时对6个/10个/16个不同样品中蛋白质的定性和定量分析。(目前16标鹿明生物可提供技术服务)。蛋白质组的概念指由一个基因组,或一个细胞、组织表达的所有蛋白质。河南蛋白质定量组学主要技术

蛋白质组学本质上指的是在大规模水平上研究蛋白质的特征。湖北常规蛋白质组学质谱分析

蛋白组学研究怎么做?PRM:平行反应监测(ParallelReactionMonitoring)是一种基于高分辨、高精度质谱的离子监视技术,能够对目标蛋白质、目标肽段(如发生翻译后修饰的肽段)进行选择性检测,从而实现对目标蛋白质/肽段进行一定定量,因此也被称之为基于液相色谱质谱联用技术的WesternBlot(LC-MSMSbasedWesternBlot,L-WB)。PRM技术基于Q-Orbitrap为表示的高分辨、高精度质谱平台,首先利用四级杆质量分析器的选择能力,用Q1选择目标肽段的母离子,随后在Collisioncell中对母离子进行碎裂,之后利用Orbitrap分析器在二级质谱中检测所选择的母离子窗口内的所有碎片信息。这样即可对复杂样本中的目标蛋白质/肽段进行准确地特异性分析。湖北常规蛋白质组学质谱分析

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