蛋白质学组翻译后修饰的研究策略：自中而下：自中而下的分析方法是自下而上分析方法的一种替代方法，分析组蛋白时其原理类似于自下而上分析策略。在使用这种分析方法时，通常需要将被检测蛋白质消化成3-9kDa范围内的肽段，因此也无法保证检测到的肽段的完整性。但是，由于仪器的进步和保留了组蛋白尾部的组合修饰，自中而下分析法正逐渐受到欢迎。自中而下更接近于自下而上法的灵敏度。自上而下：自上而下技术可以直接对完整的蛋白质进行测序，包括翻译后修饰的蛋白质和其他大的蛋白质片段，而不只是肽段。这可以比较大程度地保留与PTMs相关的信息，使其适用于组蛋白的全方面表征和分析。自上而下技术对蛋白质的有效分辨率已达到229kDa，一次可以检测到的蛋白质数量也在增加。蛋白质翻译后修饰可以改变蛋白质的物理、化学性质。武汉蛋白质磷酸化修饰组学技术服务

蛋白质学组翻译后修饰的研究策略：目前，有几种分析蛋白质翻译后修饰的策略，包括质谱（MS）、Eastern blotting、放射性标记和Western blotting。放射性标记和Western blotting是比较传统、特异性和相对定量的方法。该过程需要事先知道翻译后修饰类型。局限性包括抗体的特异性和可用性。质谱技术也常被用于翻译后修饰分析，不受修饰类型和相关修饰位点的现有知识的限制。自下而上：自下而上的技术是蛋白质组学研究中使用的质谱策略之一。在根据序列鉴定肽之前，需要使用蛋白酶消化蛋白质。由于该技术不能保证在检测过程中被检测肽的完整性和稳定性，因此无法获得不同蛋白质翻译后修饰之间关系的信息，这意味着它无法检测到某些修饰。因此，该方法不适用于分析组蛋白的组合翻译后修饰。武汉蛋白质磷酸化修饰组学技术服务蛋白质有哪些翻译后修饰？

蛋白质磷酸化修饰类型：根据磷酸氨基酸残基的不同，可将磷酸化蛋白质分为4类，即O-磷酸盐蛋白质、N-磷酸盐蛋白质、酰基磷酸盐蛋白质和S-磷酸盐蛋白质。1、O-磷酸盐蛋白质通过羟氨基酸（如丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸）的磷酸化形成。2、 N-磷酸盐蛋白质通过精氨酸、赖氨酸或组氨酸的磷酸化形成。3、 酰基磷酸盐蛋白质通过天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成。4、 S-磷酸盐蛋白质通过半胱氨酸磷酸化形成。蛋白质磷酸化修饰鉴定方法：免疫印迹技术是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的、根据特定抗原-抗体的特异性反应来检测复杂样品中的某种蛋白质的免疫生化分析方法。

蛋白质乙酰化修饰组学定量分析：1. SILAC细胞标记，组织/细胞破碎，提取、提纯目的蛋白质（基于SILAC的乙酰化修饰组学定量）。2. 使用胰蛋白酶将目的蛋白酶解成多肽片段。3. 对多肽片段进行iTRAQ标记（基于iTRAQ的乙酰化修饰组学定量）。4. 使用高效特异性乙酰化抗体对乙酰化修饰肽段进行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS对富集的乙酰化肽段进行序列分析。6. 数据分析，比对不同样本中蛋白乙酰化修饰水平差异，并对产生变化的生物学意义进行解释。蛋白质翻译后修饰在蛋白质中磷酸化位点分析时应该注意些什么问题？

蛋白质修饰位点分析：基于LC-MS/MS分析能够精确测定蛋白质或多肽分子质量这一特性，从而检测蛋白质或者多肽上位点发生何种修饰。可检测修饰类型如下： 磷酸化、糖基化、乙酰化、泛素化、丙酰化、丁酰化、丙二酰化、戊二酰化、琥珀酰化、单甲基化、二甲基化、三甲基化。1、磷酸化：信号转导、细胞周期、生长发育机理等；2、糖基化：蛋白质折叠、更新以及免疫应答等；3、乙酰化：基因表达调控、细胞凋亡、细胞代谢、蛋白质稳定性以及神经退行性的病变等；4、泛素化：细胞周期、细胞凋亡、转录调控、DNA修复以及信号转导等；5、甲基化：染色质结构及转录调控等；6、丙酰化 / 丙二酰化 / 戊二酰化 / 琥珀酰化：主要存在于线粒体和细菌中，与代谢过程密切相关。蛋白质磷酸化修饰组学具有全方面性。南京蛋白质糖基化修饰组学分析方法

乙酰化修饰对细胞核内转录调控因子的刺激有着非常重要的作用。武汉蛋白质磷酸化修饰组学技术服务

乙酰化修饰蛋白质组学分析：乙酰化修饰蛋白质组学分析是指从蛋白质组学的水平分析蛋白质乙酰化修饰，包括乙酰化蛋白质的鉴定和定量。提供基于质谱的乙酰化蛋白组研究服务。蛋白质乙酰化包括组蛋白乙酰化和非组蛋白乙酰化。组蛋白乙酰化主要是赖氨酸乙酰化，已在基因转录调控作用方面被普遍的研究。非组蛋白乙酰化构成了哺乳动物细胞中乙酰化蛋白的主要部分，参与了所有主要生物过程，包括蛋白质的定位、转移、功能和降解，遗传物质的转录和复制等。除了重要的生物学功能以外，乙酰化蛋白质及其调控酶还与衰老和多种疾病（如神经变形紊乱、心血管疾病等）紧密相关。因此，对乙酰化修饰蛋白质组进行研究有助于进一步探索细胞的生命活动与了解相关疾病的发病机制。武汉蛋白质磷酸化修饰组学技术服务

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