转录组及转录组测序（RNA-seq）：转录组即特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA的总和，包括mRNA和非编码RNA。转录组测序（RNA-seq）主要通过高通量测序研究特定组织或细胞在某个时期转录出来的mRNA的表达量，进而对相关基因和表型的关系进行分析。本质上讲RNA-seq就是在用一种新的方法实现“基因决定性状”的经典思路。在RNA-seq之前用于研究基因组表达分析的主要技术是基因芯片，不过由于高通量测序成本的下降，RNA-seq的运用愈来愈普遍。普通转录组测序主要适用于不同的生长阶段或者发育过程。武汉转录组学技术服务

转录组学技术路线及研究意义：转录组测序的研究对象为特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA的总和，包括mRNA和非编码RNA。相对于传统的芯片杂交平台，转录组测序无需预先针对已知序列设计探针，即可对任意物种的整体转录活动进行检测，提供更准确的数字化信号，更高的检测通量以及更普遍的检测范围，是目前深入研究转录组复杂性的强大工具。基于高通量测序平台的转录组测序技术能够全方面获得物种特定组织的转录本信息，从而进行基因表达水平研究、新转录本发现研究、转录本结构变异研究等。杭州转录组学技术服务转录学组测序是目前深入研究转录组复杂性的强大工具。

circRNA转录组学成环机制：circRNA环化方式分为内含子环化和外显子环化。目前主流的成环机制可归类为：依赖于剪切体的索尾插接环化。在mRNA前体上，通过连续的组装小核核糖体蛋白从而催化外显子下游的5′供体的位点连接到上游的3′受体的位点，索尾插接形成环化，然后通过剪切形成circRNA。顺式作用元件促进circRNA形成。部分circRNA外显子两侧的内含子中含有反向互补序列，首先在剪切位点上并排形成RNA双链体，再通过可变剪切形成带内含子和不带内含子两种不同的circRNA。或者外显子内部以及两侧的内含子可以竞争进行RNA配对，然后通过可变剪切形成不同类型的circRNA。

普通转录组学测序适用于哪些情况？普通转录组测序主要适用于两大类：一是不同的生长阶段或者发育过程；二是不同的环境、药物、病原菌等逆境胁迫处理。转录组学测序必须做生物学重复么？需要几个重复？生物学重复是生物实验所必须的，转录组测序也不例外，至少3次生物学重复。准备生物重复样品时，通过对实验的预先设计和控制，尽可能将与实验处理无关的背景条件控制在同一水平，减少批次效应对结果的影响。转录组学测序可以同时测到mRNA、lncRNA、micRNA以及circRNA么？我们通常所讲的转录组测序只能测到mRNA。但是全转录组测序通过构建两个测序文库（一是小RNA测序文库、二是lncRNA测序文库）是可以测到以上4种RNA的。转录组具有组织特异性的特点。

circRNA转录组学：是一类具有闭合环状结构的非编码RNA分子，没有5′帽子结构和3′poly（A）结构，主要位于细胞质或储存于外泌体中，不受RNA外切酶影响，表达更稳定且不易降解，已被证明普遍存在于多种真核生物体内[1]。大多数circRNA是由外显子环化而成，也有部分circRNA是由内含子环化而成的套索结构。同时由于circRNA含有大量的miRNA应答原件（MREs），能与AGO蛋白形成RNA诱导沉默复合体（RISC）的催化关键，然后导致circRNA降解。根据来源，circRNA可大致分为四类：全外显子型的circRNA，内含子和外显子组合的EIcircRNA，内含子组成的套索型ciRNA，由病毒RNA基因组、tRNA、rRNA、snRNA等环化产生的circRNA。转录组学可以直接测定每个转录本片段序列。北京靶向转录组学研究内容

转录组学分析转录本的结构和表达水平的同时，还能发现未知转录本和稀有转录本。武汉转录组学技术服务

单细胞转录组学技术：Anydeplete技术首先通过随机引物进行一链合成，一链合成引入核苷酸类似物，用于酶切打断，二链合成同样引入核苷酸类似物用于保证链特异性。然后两端加上接头，接头一条链也带有核苷酸类似物，用于酶切降解。当形成单链文库后，设计特异性引物与rRNA形成文库结合，一轮退火延伸，rRNA文库形成双链结构。Reverseadaptor上带有特异的酶切位点，当形成双链结构酶切位点被识别，切去接头，这样rRNA形成的文库不带有完整的接头，而其他文库带有完整接头，通过PCR扩增富积既能得到想要的信息，包含mRNA及LncRNA信息。同样Anydeplete技术与10×genomics技术一样，包含分子标签，可分析duplication及PCR产生突变位点。武汉转录组学技术服务

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