Labelfree非标记定量蛋白质组学技术特点:(1)不需要标记处理,操作简单,成本低、实验周期短;(2)每个样品单独处理、上机;(3)可以做任意样本的总蛋白质差异定量,样品类型不受限制;(4)对单个样品的蛋白总量要求相对较低,对于组织本身蛋白量不高,可以选择Label-Free,适用于一些难收集样品;(5)定性没有问题,但是定量的准确性较标记定量稍差,会受到质谱稳定性等因素的影响;(6)适合于大样本量的定量比较(大于24个样本)。蛋白质组学在医学的研究应用:蛋白质组学(Proteomics)是研究细胞、组织或生物体中蛋白质组成、定位、变化及其相互作用规律的科学。蛋白质组的概念与基因组的概念有许多差别。哈尔滨Label free非标记定量蛋白质组学研究方法
蛋白质组学主要以全蛋白组(组织、细胞)、线粒体蛋白组、叶绿体蛋白组和外泌体蛋白组为研究对象,通过对蛋白组进行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物学功能、作用机制、疾病诊断的标志物以及预测蛋白的上、下游变化关系。蛋白质组学可以克服核酸水平预测的不确定性、反映核酸翻译后修饰情况。常用技术:非靶向蛋白组学:蛋白质定性(胶条鉴定和溶液鉴定),高通量定量蛋白组(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),多肽组学。杭州Label free非标记定量蛋白质组学价格蛋白质组学与其它学科的交叉也将日益明显和重要。
定量蛋白质组学方法学介绍:iTRAQ:iTRAQ定量是目前定量蛋白质组学应用比较普遍的技术,该技术的关键原理是多肽标记和定量,将多肽的含量转化为114、115、116和117同位素的含量(或113、114、115、116、117、118、119和121的8标记),从而简化了定量的复杂性,然后通过多肽定量值回归到蛋白的定量值,从而测定出不同样本之间蛋白质的差异。iTRAQ定量不依赖样本,可检测出较低丰度蛋白,胞浆蛋白、膜蛋白、胞外蛋白等,且定量准确,可同时对8个样本进行分析,并可同时得出鉴定和定量的结果,特别适用于采用多种处理方式或来自多个处理时间的样本的差异蛋白分析。
LabelFree(非标记蛋白质组学技术):应用:1.需要快速在大量样本中找到差异表达的蛋白组合。2.需要在较短时间以较低成本得到具有提示意义的蛋白表达数据。3.需要检测的样品蛋白含量低。4.需要检测相互作用蛋白。技术特点:1.对质谱仪器设备要求较高,色谱和质谱需要同时有较好的稳定性和重复性。2.需要有特殊的定量分析软件。3.对样品中蛋白质总量要求较低,实验周期短,实验费用低。4.不需要额外并且昂贵的标记试剂,排除了标记过程带入实验误差的风险,同时也不必考虑标记效率的问题。定量蛋白质组学技术主要分为标记(label)和非标记(label free)定量策略。
蛋白质组学研究这样做:蛋白质组与基因组相对应,也是一个整体的概念,随着基因组学研究的不断深入,蛋白质组学已逐渐成为研究热点,对蛋白组学的研究可以使我们更容易接近生命的机理本质,但探究成千上万的蛋白质特性也是一个重大的技术挑战。蛋白质组(Proteome)指的是某一时刻或某一状态基因组表达的所有相应的蛋白,即细胞、组织或机体全部蛋白质的存在及活动形式,其是一个动态概念,它是在组织、细胞的整体蛋白质水平上,探索蛋白质作用模式、功能机理、调节控制以及蛋白质群体内的相互关系、从而获得生命活动调控网络的全方面而深入的认识,以揭示生命活动的基本规律。定量蛋白质组学通过对蛋白质的定量分析,以了解基因在不同的生理、病理和逆境条件下的表达情况。广州新型修饰蛋白组学价钱
蛋白质组学技术有等电聚焦。哈尔滨Label free非标记定量蛋白质组学研究方法
定量蛋白质组学的方法学背景和意义:从生命活动的直接执行者——蛋白质的角度研究生命现象和规律(特别是疾病防治和病理研究)已成为研究生命科学的主要手段。而这些研究往往离不开对细胞、组织中含有蛋白质种类和表达量的研究。对处不同时期、不同条件下蛋白质表达水平变化的研究,识别功能模块和路径,监控疾病的生物标志物,这些研究都需要对蛋白质进行鉴定和定量。生物质谱技术的出现和不断成熟为蛋白质差异表达分析提供了更可靠、动态范围更广的研究手段。基于质谱技术,科学家们不断开发出新的定量蛋白质组学方法,来了解细胞、组织或生物体的整体蛋白质动力学。哈尔滨Label free非标记定量蛋白质组学研究方法
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