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湖北蛋白质泛素化修饰组学鉴定

来源: 发布时间:2022-02-15

什么是蛋白质的翻译后修饰?蛋白质的翻译后修饰()是指蛋白质在翻译后的化学修饰。对于大部分的蛋白质来说,这是蛋白质生物合成的较后步骤。PTM是细胞信号传导中的重要组成部分。通过向修饰基团添加一个或多个氨基酸残基或通过蛋白质水解切割该基团来改变蛋白质的性质,是蛋白质生物学功能表达的重要步骤。生物蛋白质的翻译后修饰极大地增加了蛋白质结构的类型和功能。这个过程调节细胞周期和蛋白质转录,并影响表观遗传学。蛋白质糖基化指碳水化合物通过共翻译或翻译后修饰的方式附着到蛋白质上的过程。湖北蛋白质泛素化修饰组学鉴定

蛋白质乙酰化修饰组学定量分析:1. SILAC细胞标记,组织/细胞破碎,提取、提纯目的蛋白质(基于SILAC的乙酰化修饰组学定量)。2. 使用胰蛋白酶将目的蛋白酶解成多肽片段。3. 对多肽片段进行iTRAQ标记(基于iTRAQ的乙酰化修饰组学定量)。4. 使用高效特异性乙酰化抗体对乙酰化修饰肽段进行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS对富集的乙酰化肽段进行序列分析。6. 数据分析,比对不同样本中蛋白乙酰化修饰水平差异,并对产生变化的生物学意义进行解释。湖北蛋白质泛素化修饰组学鉴定蛋白质的磷酸化修饰是生物体内重要的共价修饰方式之一。

翻译后修饰蛋白组分析:蛋白质翻译后修饰是影响蛋白质功能并调节整个细胞过程的重要方式,几乎在每个细胞过程中都是不可或缺的。分析和鉴定翻译后修饰蛋白质对揭示蛋白质的功能和深入了解各种生理现象具有重要意义。大多数翻译后修饰蛋白以低化学计量和丰度存在,这限制了在分析全细胞裂解液时对其的检测。因此,要在蛋白质组学的范围内表征翻译后修饰蛋白,纯化方法是必要的,以分离修饰蛋白和肽段,然后再进行后续分析。后续分析一般采用质谱技术进行,可以对翻译后修饰蛋白组进行定性和定量研究。

蛋白质乙酰化修饰定义:蛋白质在细胞中经过翻译后,到被运输到相应的细胞器并且发生特定的生物学作用前会经过很重要的一步加工,那就是蛋白质翻译后修饰加工。蛋白质翻译后修饰的作用主要是改变蛋白质的活性、定位或功能。通过蛋白质翻译后修饰也进一步增加了细胞通路机制和生命活动的多样性和复杂性。常见的蛋白质翻译后修饰包括磷酸化,乙酰化,糖基化,泛素化等。蛋白质乙酰化修饰,顾名思义指的就是在蛋白质原有基础上面嫁接上乙酰化基团。在细胞中,乙酰化修饰的反应由乙酰基转移酶所催化,将乙酰辅酶A的乙酰基转移并添加在蛋白质赖氨酸残基上。在早期的研究中,乙酰化修饰一直被认为是真核细胞所特有的一种翻译后修饰,直到后来研究发现原核细胞中年也存在着蛋白质乙酰化修饰。所以,乙酰化修饰是原核和真核生物所共有的一种翻译后修饰类型。蛋白质翻译后修饰组学磷酸化修饰具有灵活的特性。

蛋白质磷酸化修饰组学技术:蛋白质的磷酸化修饰是生物体内重要的共价修饰方式之一。磷酸化修饰本身所具有的简单、灵活、可逆的特性,以及磷酸基团的供体ATP的易得性,使得磷酸化修饰被真核细胞所选择接受成为一种普遍的调控手段。蛋白质的磷酸化和去磷酸化这一可逆过程,几乎调节着包括细胞的增殖、发育、分化、细胞骨架调控、细胞凋亡、神经活动、肌肉收缩、新陈代谢发生等生命活动的过程,并且可逆的蛋白质磷酸化是目前所知道的主要的信号转导方式。目前已经知道有许多人类疾病是由于异常的磷酸化修饰所引起,而有些磷酸化修饰却是某种疾病所导致的后果。在早期的研究中,乙酰化修饰一直被认为是真核细胞所特有的一种翻译后修饰。湖北蛋白质泛素化修饰组学鉴定

在众多乙酰化修饰的蛋白质中,研究较多的要数细胞核中包围DNA的组蛋白了。湖北蛋白质泛素化修饰组学鉴定

蛋白质有哪些翻译后修饰?作用机制和生物学功能是什么?前体蛋白是没有活性的,常常要进行一个系列的翻译后加工,才能成为具有功能的成熟蛋白。加工的类型是多种多样的,一般分为以下几种:N-端fMet或Met的切除、二硫键的形成、化学修饰和剪切。当合成蛋白质时,20种不同的氨基酸会组合成为蛋白质。蛋白质的翻译后蛋白质其他的生物化学官能团(如醋酸盐、磷酸盐、不同的脂类及碳水化合物)会附在蛋白质上从而改变蛋白质的化学性质,或是造成结构的改变(如建立双硫键),来扩阔蛋白质的功能。再者,酶可以从蛋白质的N末端移除氨基酸,或从中间将肽链剪开。举例来说,胰岛素它会在建立双硫键后被剪开两次,并在链的中间移走多肽前体,而形成的蛋白质包含了两条以双硫键连接的多肽链。湖北蛋白质泛素化修饰组学鉴定

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