蛋白质磷酸化修饰类型:根据磷酸氨基酸残基的不同,可将磷酸化蛋白质分为4类,即O-磷酸盐蛋白质、N-磷酸盐蛋白质、酰基磷酸盐蛋白质和S-磷酸盐蛋白质。1、O-磷酸盐蛋白质通过羟氨基酸(如丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸)的磷酸化形成。2、 N-磷酸盐蛋白质通过精氨酸、赖氨酸或组氨酸的磷酸化形成。3、 酰基磷酸盐蛋白质通过天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成。4、 S-磷酸盐蛋白质通过半胱氨酸磷酸化形成。蛋白质磷酸化修饰鉴定方法:免疫印迹技术是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的、根据特定抗原-抗体的特异性反应来检测复杂样品中的某种蛋白质的免疫生化分析方法。乙酰化修饰是体内高度保守的可逆转的蛋白修饰。浙江磷酸化修饰蛋白质组学服务
翻译后修饰蛋白组学分析:在蛋白翻译后修饰方式的鉴定过程中,蛋白会首先被酶切成肽段,然后进入质谱进行分析。通过质谱分析,得到的是一系列肽段的分子质量信息。对于某一个特定肽段而言,在没有发生任何翻译后修饰的情况下,其序列信息和分子量是确定的。当它发生了某种翻译后修饰之后,例如磷酸化修饰,由于序列信息和分子量是确定的,磷酸根的分子量也是确定的。在质谱检测过程中发现其中的部分肽段的分子量刚好增加了一个磷酸根的分子量,假设这个肽段就发生了磷酸化修饰,再通过二级质谱图进行二次确认。南京糖基化修饰蛋白质组学价格蛋白质修饰可检测修饰类型有磷酸化、糖基化、乙酰化、泛素化、丙酰化、丁酰化、丙二酰化。
蛋白质翻译后修饰组学:蛋白质翻译后修饰(Post-translational modification, PTM)是指对翻译后的蛋白质进行共价加工的过程。它通过在一个或多个氨基酸残基加上修饰基团,可以改变蛋白质的物理、化学性质,进而影响蛋白质的空间构象和活性状态、亚细胞定位、折叠及其稳定性以及蛋白质-蛋白质相互作用。蛋白质翻译后修饰的丰度变化在生命活动研究中具有重大意义,异常的翻译后修饰会导致多种疾病的发生。质谱可以分辨蛋白质修饰前和修饰后分子量上的变化,因此只要知道靶蛋白翻译后修饰前后分子量的变化,就能对翻译后修饰方式进行鉴定和定量。
蛋白质磷酸化修饰鉴定方法:免疫印迹技术:技术优势特点。1、 检测特异性高。2、能够特异鉴定单个磷酸化位点。同位素标记(Isotope Labeled)结合免疫印迹法:此方法的原理是当蛋白发生磷酸化时,放射性32P的掺入和分子质量变化引起的凝胶迁移(gelshift),再通过免疫印迹方法检测同位素标记,从而达到鉴定磷酸化蛋白的目的。技术优势特点:1、检测技术灵敏并且直观。2、常用于体外磷酸化反应结果检测。3、 磷酸化鉴定不受抗体限制。4、可同时分析多个蛋白磷酸化。蛋白质磷酸化修饰鉴定方法有免疫印迹技术。
蛋白质乙酰化修饰定义:蛋白质在细胞中经过翻译后,到被运输到相应的细胞器并且发生特定的生物学作用前会经过很重要的一步加工,那就是蛋白质翻译后修饰加工。蛋白质翻译后修饰的作用主要是改变蛋白质的活性、定位或功能。通过蛋白质翻译后修饰也进一步增加了细胞通路机制和生命活动的多样性和复杂性。常见的蛋白质翻译后修饰包括磷酸化,乙酰化,糖基化,泛素化等。蛋白质乙酰化修饰,顾名思义指的就是在蛋白质原有基础上面嫁接上乙酰化基团。在细胞中,乙酰化修饰的反应由乙酰基转移酶所催化,将乙酰辅酶A的乙酰基转移并添加在蛋白质赖氨酸残基上。在早期的研究中,乙酰化修饰一直被认为是真核细胞所特有的一种翻译后修饰,直到后来研究发现原核细胞中年也存在着蛋白质乙酰化修饰。所以,乙酰化修饰是原核和真核生物所共有的一种翻译后修饰类型。质谱是蛋白质翻译后修饰检测的常用技术之一。上海蛋白质翻译后修饰组学研究
蛋白质翻译后修饰在蛋白质中磷酸化位点分析时应该注意些什么问题?浙江磷酸化修饰蛋白质组学服务
蛋白质修饰位点分析:基于LC-MS/MS分析能够精确测定蛋白质或多肽分子质量这一特性,从而检测蛋白质或者多肽上位点发生何种修饰。可检测修饰类型如下: 磷酸化、糖基化、乙酰化、泛素化、丙酰化、丁酰化、丙二酰化、戊二酰化、琥珀酰化、单甲基化、二甲基化、三甲基化。1、磷酸化:信号转导、细胞周期、生长发育机理等;2、糖基化:蛋白质折叠、更新以及免疫应答等;3、乙酰化:基因表达调控、细胞凋亡、细胞代谢、蛋白质稳定性以及神经退行性的病变等;4、泛素化:细胞周期、细胞凋亡、转录调控、DNA修复以及信号转导等;5、甲基化:染色质结构及转录调控等;6、丙酰化 / 丙二酰化 / 戊二酰化 / 琥珀酰化:主要存在于线粒体和细菌中,与代谢过程密切相关。浙江磷酸化修饰蛋白质组学服务
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