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单分子阵列数字ELISA易用性

来源: 发布时间:2024-12-24

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先进新型的单分子检测方法的普及版;每个生物/医学实验室都用得起的单分子免疫检测;使用现有平台就能做的单分子免疫检测;

芯弃疾.数字ELISA-独特创新技术方案:单分子芯片阵列化技术+POCT小型化:使用微米级捕获结构+二次流原理,磁珠捕获量更多(数十万磁珠反应载体)、更稳定捕获;绝大部分试剂反应迁移到芯片上,能真正实现“芯片实验室”(LabonChip);

同样的检测方案,通过数十万个磁珠阵列中,逐一检测到每个阳性磁珠信号,得到高灵敏的检测结果。 5)数字化高敏ELISA芯片试剂盒,微量样本可同时测2-4个指标;单分子阵列数字ELISA易用性

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为了证明检测极低浓度的可能诊断价值使用数字ELISA检测血液中的蛋白质,对接受治理性前列腺切除术(RP)的患者血清样本中的PSA进行了测量。PSA是前列腺病的血清生物标志物病症既用作筛查工具,也用于监测住院患者的复发接受治理性前列腺切除术28。治理性前列腺切除术后,绝大多数PSA被消除,水平低于标准商用检测方法的检测限(3pM或0.1ng/mL)。定期监测这些患者的PSA恢复情况可以检测前列腺病的复发,但术后几年内生化复发可能不会被发现。 单分子蛋白数字ELISA灵敏度芯弃疾JX-8B数字ELISA,多重检测,同一样本就能测试2-6项指标;

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我们已经开发了两种临床相关蛋白的检测方法——前列腺特异性抗原(PSA)和肿瘤坏死因子α(TNF-α),以确定高酶标记物单体提供的灵敏度转化为高灵敏度的检测方法血液中的蛋白质。两种蛋白质的数字ELISA如图1所示??⒄庑┦匝榈墓丶问牵褐樽优ǘ群土街直昙鞘约粒觳馐约梁兔概剂铮┑呐ǘ?。珠子浓度的选择取决于几个相互竞争的因素。首先,足够的珠子必须在场以从热力学和动力学中捕获大部分目标分析物从热力学角度看,100μL中有20万个珠子,每个珠子大约有8万个与之结合的抗体25相当于约0.3nM的抗体浓度,在该浓度下,抗体-蛋白平衡导致高捕获效率(>70%)(D.M.R.,E.P.F.,D.C.D.,未发表工作)。

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动力学上,对于200,000个微球分散在100μL中,珠子之间的平均距离约为80μm。大小为TNF-α和PSA(分别为17.3和30kDa)的蛋白质将在不到1min的时间内扩散80μm。表明,在2小时的孵育过程中,蛋白质分子的捕获不会受到限制动力学上。其次,必须有足够的珠子被加载到阵列上以限制泊松噪声。200,000个珠子加载到50,000孔阵列中,通?;岬贾?0,000–30,000个微球被困在1mL孔中。对于典型的背景信号为1%活性微球(见下文),这种装载导致背景信号为200-300个活性微球检测到,对应于泊松噪声的可接受变异系数(CV)为6-7%。第三,过高的微球浓度可能导致:a)非特异性结合增加,降低信噪比;以及b)分析物与微球的比例过低,导致活性微球的比例过低,从而导致泊松噪声引起的高CV。这些因素的平衡NatBiotechnol.作者手稿;可在PMC2010年12月1日获得。Rissin等人第5页因素意味着每100μLoftest样品含有20万到100万颗珠子是比较好的数字ELISA。同时,为了获得可接受的背景信号(1%)和泊松噪声)。 每个生物/医学实验室都用得起的单分子免疫检测;

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芯弃疾JX-8B数字ELISA高敏检测产品;具有以下特点:多重、超敏微量、极速灵活、开放; 
只有少量分泌蛋白可测量的可能性突显了蛋白质测量领域面临的挑战:医学上相关的生物标志物可能存在于非常低的丰度中。免疫测定仍然是是蛋白质生物标志物敏感和特异性测量的基础。然而,传统的免疫分析技术在检测不可测量的生物标志物时灵敏度不足,这些生物标志物肯定位于当前可检测范围之下。主流的传统免疫分析方法——包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光和电化学发光——的灵敏度下限约为10^-13M(~<0.1pM)。许多降低灵敏度的方法已被描述,包括拉曼增强信号检测、电感耦合等离子体质谱,但这些方法的数据表明其成功有限。非常规方法如亚飞摩尔级检测具有明显的权衡,例如程序较长或无法提供定量答案。
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    芯弃疾JX-8B数字ELISA产品每个生物实验室都用得起的单分子免疫检测我们的方法利用了亚飞克尔反应室阵列(图1C)我们称之为单分子阵列(SiMoA)——可以分离和检测单个酶分子20-24。这种方法借鉴了Walt等人20-23的工作阵列用于研究单个酶的动力学和抑制作用。我们的目标是利用捕获和检测单个酶的能力来检测用酶标记的单个蛋白质分子。在这个单分子免疫测定的第一步(图1A),在微球(直径μm)上形成一个三明治抗体复合物,结合的复合物用酶标记,如同常规的基于微球的ELISA。当测定含有极低浓度蛋白质的样品,蛋白质的比值分子(以及由此产生的酶标记复合物)与微球的比例很小(通常小于1:1),因此含有标记免疫复合物的微球百分比遵循泊松分布,导致单个微球上存在单一免疫复合物。例如,如果在(3000个分子)的蛋白质中捕获并标记了50μM的蛋白质,并且在200,000个微球上进行标记,则珠子,然后,。无法检测到这些低数量的酶使用标准检测技术(例如,平板阅读器)的标签,因为荧光染料由每种酶生成的产物扩散到一个大卵试验体积(通常为),并进入其中需要数十万种酶标签才能产生高于该水平的荧光信号背景。 单分子阵列数字ELISA易用性

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