芯弃疾JX-8B数字ELISA产品

每个生物实验室都用得起的单分子免疫检测

我们已经开发了两种临床相关蛋白的检测方法——前列腺特异性抗原（PSA）和肿瘤坏死因子α（TNF-α），以确定高酶标记物单体提供的灵敏度转化为高灵敏度的检测方法血液中的蛋白质。两种蛋白质的数字ELISA如图1所示。开发这些试验的关键参数是：珠子浓度和两种标记试剂（检测试剂和酶偶联物）的浓度。珠子浓度的选择取决于几个相互竞争的因素。首先，足够的珠子必须在场以从热力学和动力学中捕获大部分目标分析物从热力学角度看，100μL中有20万个珠子，每个珠子大约有8万个与之结合的抗体25相当于约0.3nM的抗体浓度，在该浓度下，抗体-蛋白平衡导致高捕获效率（>70%）(D.M.R.，E.P.F.，D.C.D.，未发表工作）。 芯弃疾JX-8B数字ELISA，微量检测，使用微量样本就能测试；芯弃疾单分子数字ELISA检测平台开发

    芯弃疾JX-8B数字ELISA产品每个生物实验室都用得起的单分子免疫检测SiMoA通过将单个酶产生的荧光团限制在极小范围内，从而能够检测到非常低浓度的酶标记物体积（~50fL），导致荧光产物分子的局部高浓度。为了在免疫测定中实现这种定位，在第二步中，将珠子加载到一个阵列为离散的微升大小的孔（图1C）。本研究中使用的2毫米宽阵列有~50,000个孔，孔径为μm，孔深为μm。加载后的阵列在含有荧光酶底物液滴的情况下，用橡胶密封圈密封。Rissin等人，第3页将每个微球隔离在飞升反应室中。具有单一酶的微球标记的免疫复合物在50飞升的反应室中产生局部高浓度的荧光产物（图1D）。通过使用标准显微镜光学系统获取阵列的时间变化荧光图像，可以区分与单一酶分子相关的微球（“开启”孔）和不与酶相关的微球（“关闭”孔）；补充图1显示了“开启”和“关闭”孔的荧光直方图。成像阵列可以成千上万的单个免疫复合物同时检测。通过测定供试品中的蛋白质浓度来确定计算含有珠子和荧光产物的孔数相对于含有珠子的孔数（图1D）。使用SiMoA，浓度是因此，我们称SiMoA应用于检测单个免疫复合物为数字ELISA。 进口数字ELISA极速检测芯弃疾JX-8B单分子小型化ELISA检测产品，每个医学实验室都能用的单分子检测；

 芯弃疾JX-8B单分子ELISA高敏检测产品具有开放的优势：

开放：可匹配各种免疫检测项目，兼容各种自行开发的试剂；

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芯弃疾JX-8B数字ELISA，我们为什么能做到？产品主要原理同单分子阵列技术：

非常近，已经描述了两种数字蛋白质测量方法，这些方法能够提高对单分子水平的灵敏度。一种方法依赖于在固相上形成免疫三明治复合物，然后化学解离并通过激光计数每个分子。第二种方法由美国开发，依赖于单分子阵列和同时计数单分子捕获微珠。这两种方法都能将检测能力的下限降低10倍或更多，与增强的模拟放大方法相比，但后者技术也易于与高通量自动化仪器兼容，用于ELISA试剂处理。通过使用大量微孔阵列，可以同时获取和查询数百到数万个数据点，实现快速数据采集和稳健统计。此外，从阵列中可能获得的快速数据采集可以应用于预编码具有不同荧光特性的多个微珠亚群，从而在单分子水平上实现高通量多重分析。 芯弃疾单分子ELISA检测试剂盒，多重超敏检测，多重指标也能检测到亚皮克级！

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由于活性珠子的百分比接近50%（酶与微球的比例大于~1：1.5)，然而，使用图像分析软件区分“开启”和“关闭”孔变得具有挑战性，我们达到了数字动态范围的实际上限。例如，图2中7fM(~45%活性）的信号偏离了线性。因此，这里使用50,000个孔展示的数字线性动态范围是从3.5fM到350zM，即大约四个对数单位。前提是蛋白质使用适当的酶浓度进行标记，这种动态范围对于许多临床应用来说是足够的 单分子POCT产品，帮您数字化高灵敏检测，且微量样本多重指标检测；生物实验室数字ELISA检测平台开发

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数字ELISA测量蛋白质浓度远低于传统ELISA的能力源于两种效应：1）SiMoA对酶标记的高度敏感性；以及2）通过数字化蛋白质检测可以实现的低背景信号。任何免疫测定的灵敏度由其灵敏度决定。检测技术到标签，抗体亲和力，试验背景，以及背景测量值的变异（%CV）27.SiMoA对酶非常敏感标签（图2）为在数字ELISA中检测亚飞摩尔浓度的标记蛋白提供了基础。也就是说，对于给定亲和力的抗体，其灵敏度为免疫测定将由测定背景决定，SiMoA的高标记灵敏度有助于降低这种背景。对照实验表明，数字ELISA的背景来自于检测抗体和酶的非特异性结合（NSB）与捕获珠表面结合（补充表2）。AsSiMoA相比传统检测方法具有更高的标记灵敏度，明显减少了检测抗体（~1nM)和酶标记物（1–50pM)的需要，以检测结合事件，与传统方法相比（标记试剂浓度~10nM)。降低的标记物浓度减少了NSB到捕获表面，从而导致背景信号明显降低。 芯弃疾单分子数字ELISA检测平台开发