WES测序

局限性

检测范围有限：无法检测外显子间区域和非编码序列区域的变异，也不能覆盖整个基因.

对某些变异不敏感：在检测重复序列扩增、G-富集区域和GC含量高的区域等变异时，效果可能不佳.

应用

遗传病诊断与研究：可诊断病因不明的遗传病，明确致病突变，还能用于产前诊断，辅助家庭生育决策.

**研究：助力**基因突变检测，为**的早期诊断、***方案制定及预后评估提供依据.

药物基因组学：检测结果可指导医生选择靶向药物或进行基因***，实现精细医疗. 二代测序的流程有哪些？天津二代测序流程

二代测序——比较基因组分析（针对多个微生物基因组）：

共线性分析：比较不同微生物基因组之间基因的排列顺序和位置关系。例如，在亲缘关系较近的细菌菌株之间，大部分基因的排列顺序可能是相似的，但可能会有一些基因的插入、缺失或者易位等现象。通过分析共线性，可以了解微生物在进化过程中的基因组结构变化。

基因家族分析：确定不同微生物基因组中存在的基因家族?；蚣易迨怯梢蛔榫哂邢嗨菩蛄泻凸δ艿幕蜃槌?。例如，在微生物的耐药基因家族中，不同成员可能具有不同程度的耐药性相关功能。通过分析基因家族的扩张和收缩情况，可以了解微生物对环境压力（如***使用）的适应策略。

单核苷酸多态性（SNP）分析：在重测序项目中，SNP分析是很重要的一部分。SNP是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。通过分析SNP，可以了解微生物在不同环境或者不同宿主中的遗传变异情况。例如，在研究传染病病原体的传播过程中，SNP分析可以追踪病原体在不同患者之间的传播路径。 江苏嘉安健达二代测序运用二代测序广泛应用于基因组学研究。

二代测序应用于蛋白组测序的常见方式①？

基于转录组测序间接推断蛋白信息

原理：由于蛋白质是由mRNA翻译而来，先利用二代测序技术对转录组（主要是mRNA）进行高通量测序，获得基因转录水平的信息。基于中心法则中mRNA和蛋白质的对应关系，在一定程度上可以推测出相应蛋白质可能的表达情况。例如，通过分析mRNA的表达量高低，预估对应蛋白质的丰度趋势。如果某个基因的mRNA在样本中表达量很高，那么大概率其翻译产生的蛋白质在细胞内的含量也相对较高，但这只是初步推断，因为还存在翻译后调控等影响因素。

应用案例：在研究某种植物在不同生长阶段的蛋白表达变化时，先进行转录组测序，发现与光合作用相关的一些关键基因的mRNA在植物生长旺盛期表达量***上调，后续再通过其他蛋白检测手段验证到对应的光合作用相关蛋白质含量确实增多，这就体现了通过转录组测序间接了解蛋白表达趋势的可行性。

二代测序的数据量

全基因组测序

一般人类全基因组测序，若测序深度为30x-50x，人类基因组大小约3Gb，则数据量在90Gb-150Gb之间。如进行高深度测序以发现更多低频突变等罕见疾病信息，测序深度达100x以上，数据量会超300Gb.

外显子测序

外显子总长度约30Mb，占全基因组1%左右，测序深度50x-100x时，数据量需1.5Gb-3Gb.

转录组测序

常规转录组测序，基础基因表达分析建议20M-30Mreads，数据量约5Gb-20Gb；检测低表达基因或复杂转录本拼装推荐50M-100Mreads，数据量相应增加；100Mreads以上属于高深度测序，适合解析复杂可变剪切事件和罕见转录本.长读长转录组测序，解析复杂转录本推荐数据量为5Gb-20Gb，研究全转录组复杂性建议单样本数据量>20Gb.

ChIP-seq

转录因子检测标准为20M-40Mreads，组蛋白修饰宽谱图则需要更高测序量. 基于二代测序的罕见疾病诊断将迅速过渡到临床服务，其他医学领域的宝贵案例研究。

常见的二代测序类型①

全基因组测序（WGS）：对生物体整个基因组进行测序，涵盖所有基因、非编码区域、调控区域等。能***检测基因组变异，但数据量和成本较高，适用于复杂疾病研究、物种进化分析等.

全外显子组测序（WES）：针对基因组中全部外显子区域测序，可快速鉴定基因突变，性价比高，常用于遗传病诊断、**基因突变检测等，助力发现致病基因和潜在***靶点.

转录组测序（RNA-Seq）：对特定细胞或组织在特定状态下的 RNA 转录情况测序，包括 mRNA、lncRNA、miRNA 等，可检测基因表达水平、剪接变异、可变剪接等信息，用于基因表达调控研究、疾病标志物筛选、药物研发等. NGS测序是二代测序吗？静安区二代测序分析

二代测序是2005年以后开始的吗？天津二代测序流程

二代测序用于蛋白组测序面临的挑战

数据解读复杂性：二代测序产生的转录组数据量极其庞大，要从中准确挖掘出与蛋白组实际情况紧密相关的有效信息并不容易，需要运用复杂的生物信息学算法和工具进行数据分析、比对、注释等操作，而且从转录组信息到准确推断蛋白质情况还存在诸多不确定因素，比如可变剪接、翻译后调控等都会干扰解读。

定量不准确问题：虽然能通过转录组测序推测蛋白表达量趋势，但这种定量并非直接对蛋白质本身的精确测定，与实际蛋白质的真实含量存在偏差，而且不同样本间、不同实验批次间的转录组定量数据的稳定性和可比性也有待进一步提升，难以像专门的蛋白定量技术那样精细反映蛋白量的变化。 天津二代测序流程