实验期间每天进行阴道涂片,观测动情周期变化。进一步地,检测***水平是指:检测雌***(e2)、促卵泡生长素(fsh)和促黄体生成素(lh)的水平。进一步地,检测对比卵巢重量是指:比较各组大鼠双侧卵巢脏器系数。进一步地,阴道涂片是指:采用阴道脱落细胞涂片法,使用染色剂为亚甲基蓝。本发明利用顺铂成功地建立了大鼠卵巢早衰模型,为基础研究建立稳定的卵巢早衰动物模型奠定了良好的基础。本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义。提及的术语和短语如有与公知含义不一致的,以本发明所表述的含义为准。附图说明图1:e2水平检测结果示意图。图2:fsh水平检测结果示意图。图3:lh水平检测结果示意图。图4:大鼠体重检测结果示意图。图5:大鼠卵巢重量统计示意图。图6:动情周期检测(光镜下10倍)示意图,其中,a、b、c、d依次为:动情前期,动情期,动情后期,动情间期。图7:he染色观察不同方法造模对卵泡形态的影响(光镜下10倍)示意图,其中,a、b、c、d依次为:空白组,2mg组,4mg组,6mg组。具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明。然而,本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解,在不背离本发明的精神和范围的前提下。上海东寰在动物建模方面已经有了多年的技术经验。浦东新区正规疾病动物模型建模
cns,pirb的功能和下游抑制性信号通路仍然未被阐明,因此迫切需要pirb的细胞和动物模型。目前对于pirb基因功能的研究,多采用可溶性的pirb的胞外段(pirbextracellularpeptide,pep)和抑制剂,或者采用慢病毒转染。前者受到是否能够透过血脑屏障和抑制剂效率的影响,后者慢病毒转染在原代细胞和在体的转染效率比较低,使研究pirb的功能受到极大的限制。为解决这些问题,我们通过crispr/cas9技术建立了pirb基因敲入小鼠,将pirb基因敲入c57bl/6j的rosa26位点,为研究pirb在免疫系统或者神经系统的作用和机制提供了很好的工具。技术实现要素:本发明的目的在于提供pirb基因敲入的小鼠动物模型。肺病疾病动物模型建模供应商便于研究者按实验目的需要随时采取各种样品。
引起组织坏死,从而导致卵巢功能早衰。技术实现要素:针对上述现有技术,本发明提供了一种利用顺铂建立大鼠卵巢早衰模型的方法。本发明根据“顺铂可诱导卵巢细胞凋亡,引起组织坏死,从而导致卵巢功能早衰”这一原理,使用不同浓度及不同方法建立了化疗性损伤卵巢早衰动物模型,并对比各种方法间的优劣性,筛选出顺铂比较好的浓度及给药时间,为筛选顺铂导致的卵巢早衰动物模型比较好剂量提供了一种操作简单,成功率高,结果可靠的实验方法。本发明是通过以下技术方案实现的:一种利用顺铂建立大鼠卵巢早衰模型的方法:将剂量为按体重一日2~3mg/kg的顺铂施用于大鼠,施用方式为腹腔注射,施用方法:连续施用7天,末次注射后第15天,得大鼠卵巢早衰模型。或:将剂量为按体重4~6mg/kg的顺铂施用于大鼠,施用方式为腹腔注射,施用方法:第1天、第8天施用;末次注射后第15天,得大鼠卵巢早衰模型。进一步地,可将顺铂溶于%氯化钠溶液配置成顺铂注射液,然后注射。所述顺铂,可市场常规购买得到,比如齐鲁制药公司生产的顺铂。进一步地,注射期间每天称量大鼠体重,注射后每周称量2次;末次注射后15天,麻醉取血检测***水平,取卵巢检测对比卵巢重量。
得到大鼠慢性背根神经压迫模型。进一步地,l型棒的直径为,***端长3-5mm,第二端长1-3mm。具体地,根据大鼠体重选择l型棒的直径大小:当大鼠体重在200g到不足220g范围时,采用直径为;当大鼠体重在220g到不足250g范围时,采用直径为;当大鼠体重在250g到不足300g范围时,采用直径为;当大鼠体重在300g到350g范围时,采用直径为。在另一个具体实施方式中,压迫元件为u型棒;步骤三具体为:将u型棒的***端和第二端分别插入到左侧或右侧腰4椎间孔及腰5椎间孔中,得到大鼠慢性背根神经压迫模型。进一步地,压迫元件采用不受磁场干扰、置入体内不会对神经造成化学刺激以及具有一定可塑性的材料制备而成。在一个具体实施方式中,压迫元件采用黄铜和锌的混合物制备而成。具体地,混合物为h62黄铜,即含铜量为%~%,余量为锌含量的黄铜。而铜、锌皆属于非铁磁性物质。在另一个具体实施方式中,压迫元件采用聚乳酸(polylactic,pla)制备而成。pla是一种无毒无刺激的合成高分子材料,其原料是乳酸,不含任何金属。h62黄铜棒或pla棒在体内,即不会受磁疗、电疗引起的磁场、电场干扰,也不会对磁疗、电疗仪器及磁共振仪器产生不良影响。大量的遗传变异可作为研究人类疾病的借鉴。
f1代小鼠southern印记的5’探针引物如下:primersfor5’probe:5’probeforwardprimer:5’-aaacgtggagtaggcaatacccagg-3’5’probereverseprimer:5’-aaagaagggtcacctcagtctccct-3’primersfor3’probe:3’probeforwardprimer:5’-ttctgggcaggcttaaaggctaac-3’3’probereverseprimer:5’-aggagcgggagaaatggatatgaag-3’southern印记的目标片段大小如下:5’probe-bamhi:3’probe-avrii:。步骤c、采用限制性内切酶bamhi和avrii对dna进行切割;琼脂糖凝胶电泳分离dna;步骤d、将dna转到尼龙膜上;步骤e、探针变性后,与dna分子进行杂交,nbt/bcip化学显色法显色,拍照观察。southern杂交结果如图6所示,可以看到:6、8、9号pirb基因敲除小鼠如果被bamhi切割,在,wt小鼠只在,如果被avrii切割,pirb基因敲除小鼠在,wt小鼠只在。步骤6、将f1代杂合子小鼠近交获得f2代纯合子pirb基因敲入小鼠,即为本发明所述小鼠pirb基因敲入的动物模型。将本发明获得的动物模型f2代纯合子小鼠与同品系小鼠组织/细胞特异性cre表达的小鼠杂交,获得f3代小鼠,可以实现在不同组织或者细胞类型中敲入pirb基因。对f3代小鼠进行基因型的鉴定:含有无(pirb-cwt)、一个(pirb-chet)或者两个。欢迎致电咨询疾病动物模型建模。南京心血管疾病疾病动物模型建模
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其可与dna链交叉连接,显示出细胞毒作用。溶解后在体内无需载体转运,即可通过带电的细胞膜。由于细胞内氯离子浓度低(4mmol/l),氯离子为水所取代,电荷呈阳性,具有类似烷化剂双功能基团的作用,可与细胞核内dna的碱基结合,形成三种形式的交联,造成dna损伤,破坏dna复制和转录,高浓度时也抑制rna及蛋白质的合成。顺铂又称顺氯氨铂、氯氨铂、ddp、锡铂,是目前常用的金属铂类络合物,在分子中铂原子对其抗**作用有重要意义。但只有顺式才有意义,反式无效。其可与dna链交叉连接,显示出细胞毒作用。溶解后在体内无需载体转运,即可通过带电的细胞膜。浦东新区正规疾病动物模型建模