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江苏EdU细胞增殖检测试剂盒原理

来源: 发布时间:2023-12-09

EdU细胞增殖分析试剂采用click化学技术,可为新合成的DNA检测与定量提供比传统BrdU方法更的替代物。当在DNA合成过程中掺入修饰的核苷EdU(5-乙炔基-2-脱氧尿苷)时,可以通过快速的“click化学”反应检测到它,并且对细胞的破坏作用小。点击化学相比于BrdU具有更简便、更快速、更易操作的优点。与使用溴脱氧尿苷(BrdU)检测法不同,Click-iTEdU检测法不是基于抗体,因此并不需要DNA变性以检测掺入的核苷。此外,Click-iTEdU可以与R-PE、R-PEtandems和GFP等荧光蛋白复用提高效力。当您平行比较这些方法时,Click-iTEdU和InvitrogenClick-iTPlusEdU在测定细胞增殖方面的优势是显而易见的。上海东寰告诉您EdU细胞增殖检测试剂盒如何去使用呢?江苏EdU细胞增殖检测试剂盒原理

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可通过CellProliferationELISA,BrdU(比色法.)或CellProliferationELISA,BrdU(发光法)进行细胞群落中DNA合成测定(BrdUbased)。优点是:实验结果同增殖细胞数目紧密相关,可一步完成细胞的温和固定和变性,操作方便稳定,不破坏细胞形态。5-Bromo-2′-dULabeling/DetectionKitI(荧光法)或KitII(AP)可使用试剂盒提供的BrdU单抗,以及酶或荧光偶联二抗,检测单细胞水平的DNA合成(BrdUbased)。前者通过免疫荧光检测,后者通过荧光显微镜检测。优点是:使用核酸酶变性DNA,在不伤害细胞完整性的情况下使抗体结合BrdU。北京口碑好的EdU细胞增殖检测试剂盒价格EdU细胞增殖检测试剂盒,有哪些好处值得选择?

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细胞的固定和通透(a)每孔加入150ul4%多聚甲醛细胞固定液,室温培养30分钟,弃固定液;(b)毎孔加入150ul2mg/ml甘氨酸,摇床孵育5分钟,以中和过量的多聚甲醛;(c)弃甘氨酸溶液,每孔加入300ulPBS洗液,室温清洗5分钟;(d)每孔加入300ul0.5%TritonX-100细胞通透液,室温通透10分钟,弃细胞通透溶液;(e)每孔加入300ulPBS洗液,室温清洗5分钟;该产品是采用成像检测方法对贴壁细胞进行检测,适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜等仪器。非贴壁细胞可在孵育EdU后进行细胞涂片处理,固定后再采用贴壁细胞的染色流程进行检测。也可以应用于流式细胞仪检测

传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法需要DNA变性,抗原修复,抗原抗体过夜孵育,操作步骤复杂繁琐。并且由于BrdU抗体分子较大,嵌入DNA分子中的BrdU无法直接与BrdU抗体结合,必须先进行DNA变性操作才能使BrdU抗原表位暴露,但变性的程度可能导致错误结果。如果变性不充分,会导致BrdU难以暴露,无法检测,而且变性过程从边缘向中间渗透,会导致细胞核DNA的变性不均匀,边缘模糊不清。如果变性过分,则会导致DNA断裂,甚至降解,导致核染不均一。另外,不同抗体试剂公司的抗体质量不一致,造成难以确保实验重复性,且容易产生假阳性结果。上海东寰告诉您什么是EdU细胞增殖检测试剂盒?

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羟基脲(Hydroxyurea)为DNA合成抑制剂,经过10mM羟基脲提0min处理的细胞,绿色荧光阳性的细胞几乎完全消失,因此常被用作EdU实验的阴性对照。配制好的Click-iT Additive Solution请根据每次用量适当分装后-20℃保存,避免反复冻融。Click-iT Additive Solution融化后有白色物质析出为正常现象,请上下颠倒几次,待全部溶解后使用。溶液一旦呈现棕色,则说明有效成分降解,不能再使用。皂苷促渗液可以用于全血及含红细胞的细胞悬液,以及其他含多种细胞类型的混合细胞悬液的通透。这种促渗液可以在裂解红细胞的同时,维持白细胞的光散射特性。本试剂盒做动物实验时可能需要更多的EdU,请根据实验需求用合适稀释液稀释后使用。EdU细胞增殖检测试剂盒的发展前景如何呢?天津咨询EdU细胞增殖检测试剂盒优势

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直接测定DNA合成是细胞增殖检测的准确方法之一,EdU细胞增殖检测试剂盒采用另外一种胸腺嘧啶核苷酸类似物-EdU(5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷),在细胞增殖时EdU能够插入正在复制的DNA分子中,利用EdU与染料之间的点击化学(ClickChemistry)反应可以进行高效快速的细胞增殖检测分析,可以有效地检测处于S期的细胞百分数。与传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法相比(图1),更简单,更快速,更准确。EdU只有BrdU抗体大小的1/500,在细胞内更容易扩散,不需要严格的样品变性(酸解、热解、酶解)处理,有效地避免了样品损伤,有助于在组织、的整体水平上观测细胞增殖的真实情况,具有更高的灵敏度和更快的检测速度。EdU分析方法反应条件比较温和,我们提供的一系列AndyFluor?染料标记可以用于多色通道选择,也可以用于培养细胞分析及组织切片分析(图2)。江苏EdU细胞增殖检测试剂盒原理

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