细胞上清（需采用去除外泌体的培养基）：

(1) 细胞在正常含有血清的培养基中培养一定时间，贴壁细胞密度在70 %-80 %，悬浮细胞密度在60 %-70 %；

(2) 对于贴壁细胞，去除原有培养基，换为新的不含外泌体的培养基或者无血清培养基；对于悬浮细胞，300 g，4°C，10 min收集细胞；

(3) 使用不含外泌体的培养基或者无血清培养基悬浮细胞并继续培养。细胞继续培养24-48 小时，根据细胞的生长速度确定收取上清时间；

(4) 收集细胞上清，300 g，4°C，离心10 min；小心吸取上清，注意避免吸入细胞或者细胞碎片；

(5)   3000 g，4°C，再次离心15 min，确保将细胞或者细胞碎片去除干净；

(6) 取上清，注意避免吸入细胞或者细胞碎片，合并相同的细胞培养液上清样品，装入无菌的玻璃瓶，可在4°C短期保存（1-2天），长期保存可冻存于-80°C 。建议细胞上清分离后尽快进行外泌体分离，保存在4°C和-80°C，都会对产量有一定的影响。

    体液样本收集外泌体。抽血技巧：操作要轻柔迅速。试管可翻转8-10次使样本与抗凝剂混匀，避免剧烈摇晃?；煸群?，将试管固定垂直放置于离心分离器，在顶部记录抽血的准确时间，因为抽血与离心之间的时间间隔可能是一个影响因素。外泌体在抽血后30分钟内是比较稳定的，若时间过长将导致外泌体数量增加。血小板极易因抽血时的物理因素而***并释放出外泌体，其中包括接触、压力、切力。抽血时间：除了血液黏度，体内血液的各项指标在***中变化很大。生理节律会对血小板的***产生很大的影响。白细胞的募集和循环系统中促炎细胞和***细胞会随时间变化。大量的具有特殊表面分子的微粒也被证明会随时间变化。目前尚无设计较好的实验对证实不同时间血液中外泌体的变化，故应在相同的时间采集样本。目前饮食是否会对EV产生影响尚未可知，但是由于脂蛋白可运载RNA且食物的摄取可以影响循环脂蛋白颗粒的类型、数量和作用，故抽血可在***一次用餐后一段确定的时间进行。 安徽数据库外泌体活动云生物销售外泌体抽提试剂盒。

    外泌体内包含多种不同分子，如蛋白质、脂质、DNA、mRNA和miRNA,其中miRNA受到**多的关注，由于它们在基因表达调控上有着重要作用。Goldieetal.发现在所有的小RNA中，miRNA在外泌体中所占的比例比它们的来源细胞更高。有证据显示，miRNA并不是随机整合入外泌体中的。Guduric-Fuchsetal.分析了许多不同细胞系和它们各自分泌的外泌体中miRNA的表达水平，发现一些miRNA亚群，如miR-150,miR-142-3p,miR-451更偏好于进入外泌体。类似的是，Ohshimaetal.比较了不同*细胞株分泌的外泌体中的let-7miRNAfamilymembers的表达水平，将胃*细胞株AZ-P7a的外泌体与其他细胞株如肺*细胞株SBC-3/DMS-35/NCI-H69，结直肠*细胞株SW480/SW620和胃*细胞株AZ-521的外泌体中的let-7miRNA家族的表达水平。结果是，他们发现let-7miRNA家族在胃*细胞株AZ-P7a分泌的外泌体中较丰富，但是不如其他细胞株中含量多。

industryTemplate外泌体的特点成为了一个重要因素。

    目前，外泌体研究主要集中在以下几个方向：开发疾病诊断和预后标志物揭示疾病发病机制作为药物载体，实现靶向给药作为疾病***的靶点参与免疫反应调控。外泌体蛋白质组学服务：云生物根据主流外泌体研究策略，开发了一套完整的外泌体蛋白质组学研究技术服务体系。提供从外泌体收集、鉴定到蛋白质组定性定量、数据分析一系列的技术服务项目，确保外泌体研究在同样技术标准下获得高质量研究数据。外泌体收集：对于外泌体研究，分离和收**格的外泌体是非常关键的一步。目前对于外泌体收集有：超速离心、密度梯度离心、超滤、磁珠免疫、聚合物沉淀与试剂盒提取法等几种主要方法，各种方法均存在不同优缺点。云生物在现有试剂盒法的基础上进行大量技术优化，形成了一套针对不同样品的外泌体提取试剂盒和配套收集方法。可以在提高外泌体收集丰度的同时，***减少杂蛋白残留，以保证蛋白质组分析阶段获得的数据更加稳定和可靠。 外泌体全转录组测序实验怎么分析？北京测序外泌体哪家好

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