PCR的工作原理:在TaqDNA聚合酶(热稳定DNA聚合酶)的作用下,由一对特异性引物经热变性-退火-延伸反应,三个不同温度的循环处理使得DNA由少量扩增到多量的一种体外DNA扩增技术。在反应体系内,以一对人工合成的寡核苷酸作为扩增引物,第一步,模板DNA变性,以构成脱氧核糖核酸的四种脱氧核苷酸为底物,目的基因作为模板,在DNA聚合酶的作用下模板DNA经过80-90℃高温变性,使模板DNA双链经PCR扩增形成的双链解离成单链。第二步,模板DNA与引物退火(复性),模板DNA解离成单链后温度降至50-60℃,引物与模板DNA单链互补配对。第三步,引物的延伸,DNA模板-引物结合物在DNA聚合酶作用下,70-75℃以dNTP为反应原料半保留复制合成一条新的模板DNA链。这三个步骤为一个循环,2-4分钟即可完成一个循环,2-3小时就能使极微量的DNA、片段、甚至单拷贝基因复制到几百万倍,从而实现对靶DNA的放大。由于扩增碱基序列按照靶DNA复制,因此PCR反应具有高度特异性。在准确的前提下,高效显得尤为重要。动物用PCR检测方法
宠物在疾病传染的初期,临床病症并不明显,病原的数量还不足以让检测板或血液抹片镜检两种方式观察到。目前市场上的一些检测工具主要检测宠物体内是否产生对抗某种病原的抗体,虽然快速,但在初期传染时,宠物免疫系统尚未产生抗体,所以检测出现伪阴性,进而延误诊疗。巧亦捷PCR检测试剂检测灵敏度高;且可以消除细菌性疾病原菌假阳性的可能。可应用于犬瘟、犬细小病毒、弓形虫等宠物致病菌的检测,从根本上突破了免疫学间接检测的局限。动物用PCR检测方法微流控PCR技术是一种通过将PCR反应微型化来实现PCR反应的高通量、低成本和快速的方法。
巧亦捷全自动薄膜微流控核酸检测仪器拥有多种重技术,保障结果准确:其采用Taqman荧光探针和经典PCR扩增技术,能够将生物标志物精确定量,同时输出Ct值和扩增曲线,结果判读简洁明了;质控更全1面,结果更可靠,设备体积小巧,便于搬运和携带,可在多种场景下随心使用,且薄膜微流控芯片为封闭系统操作,可很大程度避免人为和环境的污染,降低对检测环境的要求,以及对检测人员的要求。更适合宠物医院、兽医站、养殖场等多种使用场景。
使用平常的抗原试纸做动物诊断常会出现误诊的情况,如用抗原试纸条对刚买的小狗带到做检测,犬瘟试纸条检测是阴性,但回家养几天后小狗开始出现打喷嚏、咳嗽等症状,此时再去做检查,犬瘟检测则变成阳性,这种情况在宠物临床上并不少见。很有可能这只小狗在第、一次检查的时候已经传染并且向外排毒了,但是由于抗原滴度低排毒量比较小,试纸条检测不出来,错失了及早诊疗的机会。另一方面,抗体检测试纸并不能及时准确知道机体是否传染这个病原,就比如现在常见的猫咪弓形虫检测,只有猫咪接触病原一段时间后,才能产生足量的抗体,抗体试纸才出现阳性结果。当这些情况发生,结果都是令人很难过的。因为这不仅*意味着后期要花更多的Money用于诊疗,还会出现诊疗困难,毛孩子们受罪,甚至会出现我们都不愿意接受的死亡。所以我们更建议使用PCR技术进行临床诊断。巧亦捷核酸检测一体机操作非常简单,只需要放入样本就可以了,不需要手工进行核酸提取,也避免了样本污染。
巧亦捷核酸检测一体机能“稳、准、快”的检测出禽病。以犬瘟为例,CDV经由鼻、咽和上呼吸道侵入机体后首先在其附近的淋巴结和扁挑体中增殖,动物表现为ZUI初的体温升高和白细胞减少(主要是淋巴细胞减少)。传染第、一周会出现病毒血症,通过血液循环,CDV散布到全身的淋巴器1官、骨髓和上皮结构的固有膜,身体的所有分泌物中开始向外排毒。因此在病毒传染初期是无法在眼鼻分泌物中采集到病毒的,即便有少量病毒存在,胶体金试纸板也很难检测出正确的结果。这是由于胶体金试纸板上包被的抗体需要和特异抗原结合后再和预先包被的二抗结合才能显示结果,这其中需要的抗原(病毒)量较多。而PCR检测是将抗原进行扩增,只要存在抗原就可以通过特异性引物进行扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳,可见到预期大小的DNA条带出现,从而对病原体的基因组片段作出鉴定。因此,我们更推荐兽医师们使用巧亦捷核酸检测一体机。分子诊断技术大致划分为PCR技术、分子杂交、基因测序、核酸质谱、生物芯片5大类。苏州全自动PCR技术
巧亦捷核算检测一体机从样本处理开始,所有检测项目可在30-60分钟完成,自动生成报告,检测效率极大提高。动物用PCR检测方法
在宠物医院,往往没有专业的实验环境与PCR分区,样本中病原体污染、PCR反应后产物污染都是会很影响PCR结果,导致假阳性的出现,其中PCR产物污染是导致化验室环境污染**主要的因素(PCR反应中DNA的复制是指数级的增长)。而选择不善于处理低浓度样本与复杂样本的提取方法,导致核酸提取不完全或者在**1后PCR反应中存在抑制物,污染PCR反应,则会导致漏检,产生假阴性。这些都是在核酸检测过程中需要注意的点。巧亦捷PCR反应系统采用磁珠法核酸提取纯化加荧光探针PCR方法,整机一体化,实现一机提取加扩增,减少人工操作与培训时间,轻松上手。避免污染。动物用PCR检测方法