Micro Drop基座检测需要的样本量:
虽然基座检测时样本的量不是特别关键,但是必须保证两根光纤之间形成完整的液柱,这样才能保证两根光纤之间形成样本液桥。
决定液滴表面张力的主要因素是溶液中水分子的氢键结合力。通常情况下,溶液中所有的溶质(包括:蛋白,DNA,RNA,盐离子,去垢剂分子)都会降低表面张力,因为这些分子能够和水分子的氢键产生作用。虽然一般情况下1μl的样本就足可以检测了,但对于那些表面张力比较小的样本比较好使用2μl样本来检测。
现场试验的经验表明下列样本的用量足够得到准确重复性高的检测结果:
核酸水溶液:1μl;
纯蛋白:2μl;
Bradford,BCA,Lowry或者蛋白Pierce 660nm试验:2μl;
微生物细胞悬浮液:2μl。
用来测量待测物质对可见光(400~760nm)的吸光度并进行定量分析的仪器,称为可见分光光度计。湖南超微量分光光度计菌液检测
超微量分光光度计主要是用来快速检测一些样品,比如蛋白、核酸等,几乎每一个分析实验室都离不开分光光度计,那么,超微量分光光度计怎么使用呢?***小编就Micro Drop为例,给大家介绍一下超微量分光光度计使用方法。
在此之前,我们先来了解一下超微量分光光度计的原理,微量分光光度计是利用光源通过光片调整光坡长,射入样品液体中,再射入光电检测器将光能转换成电讯号。由样本及空白水样间所吸收之光能量差,与标准液之能量吸收值相比较,便可定样本中待测物浓度。Micro Drop为一款全光谱波长超微量分光光度计,适用于更宽浓度范围的样品检测,操作简便,即擦即测。
山东性价比高超微量分光光度计菌液检测A320nm 或A340nm——是基线校准波长,为检测溶液样品的浊度和其他干扰因子。
Micro Drop蛋白质检测功能:
Protein A280检测类型:
蛋白质具有很强的多样性,Protein A280功能主要用于检测那些含有Trp,Tyr残基或者含有Cys-Cys二硫键的纯蛋白,这些蛋白在280nm处吸光值较大。这个方法不需要构建标准曲线,在检测吸光值后,软件会直接计算蛋白浓度。与核酸检测一样,Protein A280光谱图显示的是10mm光程下的数据。
Micro Drop在基座模式下可以比较高检测400mg/ml的BSA而不用稀释。软件可以自动使用不同光程来检测每个样品的吸光值。
在样品的10mm吸光值>3.0(>4.5mg/ml BSA)时可以选择小容量检测。
超微量分光光度计不仅涵盖了可见光分光光度计的功能而且也可以进行紫外分光光度计的应用:
(二)UV-VIS常规可见-紫外检测:
全波长超微量分光光度计可以像普通的紫外-可见分光光度计一样行使功能。如BIO-DL MicroDrop可以显示从185到910nm的光波下样品的吸光值。**多可以同时指定检测40个波长下的吸光值并把数据显示在报告中。
(三)蛋白质的直接定量(UV法):
这种方法是在280nm波长,直接测试蛋白。蛋白质测定过程非常简单,先测试空白液,然后直接测试蛋白质。蛋白质直接定量方法,适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说,速度快,操作简单;但是容易受到平行物质的干扰,如DNA的干扰;另外敏感度低,要求蛋白的浓度较高。
朗伯一比尔(Lambert - Beer)定律是分光光度法定量分析依据的基本原理。
超微量分光光度计与传统分光光度计相比,前者具备的独特优点在于(一):
(1)所需样品体积小,*需0.5—2μl;
(2)不需要比色皿,用移液枪直接将样品滴加到检测平台上,测量时样品自动形成液柱,检测完成后只需用干净的吸水纸将样品从检测平台上擦拭干净即可,避免了因为比色皿清洗不净带来的交叉污染;
(3)一般具有多个光程(电机控制自动选择)【BIO-DL MicroDrop基座模式下光程1.0 mm、0.2 mm、0.1 mm 和 0.05 mm自动调整】,而传统分光光度计的光程为10 mm,超微量分光光度计样品无需稀释,测量范围可达到常规分光光度计的50倍【BIO-DL MicroDrop基座模式下dsDNA检测范围:2~15000ng/μl】。
消光系数是被测溶液对光的吸收大小值。上海操作简便超微量分光光度计蛋白检测
样品的吸光值与样品的浓度成正比。湖南超微量分光光度计菌液检测
Micro Drop蛋白质检测功能:
Protein BCA检测类型:
BCA是一种通过比色来检测非纯蛋白的浓度的方法,它通常用于稀释的蛋白浓度检测,以及那些在紫外区域含有吸收光杂质的蛋白的浓度检测。BCA法需要在蛋白定量前构建一个标准曲线。
BCA法是检测Cu+1离子的方法,在碱性环境下,Cu+2离子会被蛋白还原为Cu+1离子。两个联喹啉二羧酸BCA分子和一个Cu+1离子会形成紫色的螯合物。在有蛋白存在的情况下,以750nm波长的吸光值为基线,Cu-BCA形成的螯合物在562nm处有比较大吸光值。
常规检测使用试剂/蛋白样品的体积比为20:1,检测浓度范围为0.20mg/ml到8.0mg/ml(BSA)。当使用基座检测时,推荐使用4μl样品和80μlBCA试剂。
微量检测使用试剂/样品的体积比为1:1,可以检测蛋白浓度范围从0.01mg/ml至0.20mg/ml。要准备足够的样品来做基座检测,建议使用10μl样品和10μlBCA试剂(使用PCR管)。
按照试剂盒生产厂家的说明来准备标准品和构建标准曲线。确保在所有检测过程中,每个样品的处理时间及环境温度一致。
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