其局限性:① ELISA数据不能提供单个细胞产生因子的能力和频率;②因受刺激细胞群的细胞因子产生是短暂的,并且不同细胞因子基因的表达动力学可以变化,故可能需要在几个时间点收集测试样品以更好地表征实验动物或培养细胞群的细胞因子产生。③在任何一个时间点测量的细胞因子蛋白浓度可能反映细胞因子分泌,细胞因子摄取的并发过程。通过细胞和细胞因子蛋白降解。由于这些过程,测量的细胞因子蛋白水平可能xian zhu低估细胞的实际细胞因子产生潜力。④试剂不统一,标准不统一,故定量不准确等。ELISA试剂盒可提供多种形式,可检测胞内和胞外的蛋白质。流式细胞术检测
化学发光免疫分析技术的优势1.灵敏度高:灵敏度高是化学发光免疫分析关键的优越性。化学发光免疫分析能够检出放射性免疫分析和酶联免疫分析等方法无法检出的物质,对疾病的早期诊断具有十分重要的意义。2.宽的线性动力学范围:发光强度在4-6个量级之间,与测定物质浓度间呈线性关系。这与显色酶联免疫分析吸光度(OD值)2.0的范围相比,优势明显。虽然同位素放射免疫也有较宽的线性动力学范围,但是放射性限制其应用。3.光信号持续时间长:化学发光免疫分析的光信号持续时间可达数小时甚至一tian,简化了实验操作及测量。4.分析方法简便快速:绝大多数分析测定jin需加入一种试剂(或符合制剂)的一步模式。5.结果稳定、误差小:样本本身发光,不需要额外光源,避免了外来因素的干扰(光源稳定性、光散射、光波选择器),分析结果稳定可靠。6.安全性好及使用期长:到目前为止还未发现化学发光免疫分析试剂的危害性;另外这些试剂稳定,保存期可达一年之久。细胞侵袭保证了ELISA检测的灵敏度,重复性,特异性。
CCK-8试剂(Cell Counting Kit-8 细胞计数试剂 [1] )中含有WST–8:化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物(Formazan),生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。该方法已被广fan用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗**药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等。
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。验证miRNA对靶基因的调控是否真正的存在,*常用的方法就是荧光素酶报告基因。
慢病毒表达载体,即通常所说的穿梭载体,包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞,在细胞中进行病毒的包装,包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上清液后,可以直接用于宿主细胞的感ran,目的基因进入到宿主细胞之后,经过反转录,整合到基因组,从而高水平的表达效应分子。本试剂盒可以检测稳定的,细胞内的乳酸脱氢酶,当细胞受损时,这种酶会被释放出来。水质检测
以GFP作为标记的质粒可替代抗生su的作用,可以帮助识别哪些细胞成功地转染了质粒。流式细胞术检测
ELISA是一种基于酶的免疫测定方法,由于酶标的放大作用,利用酶标记抗体的免疫检测,因其高特异性和敏感性而日益受到人们的青睐。细胞因子夹心ELISA是一种敏感的酶免疫分析方法,可以特异性地检测和定量可溶性细胞因子和趋化因子蛋白的浓度。这一方法的基本原理是:①将已知抗体结合到某种固相载体表面;②加待测抗原,如两者是特异的,则发生结合,然后把多余抗体洗除;③加入与待测抗原呈特异反应的酶联抗体,使形成“夹心”;④加入该酶的底物,若看到有色的酶解产物产生,说明在孔壁上存在相应的抗原,利用酶标仪测其OD值。有色产物的量与待测抗原的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。流式细胞术检测
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1、原代细胞:ScienCell(中国区正规一级代理)人源和动物源各种原代细胞。
2、培养基:原代细胞**低血清、无血清、无异源蛋白无动物成分培养基。
3、细胞培养试剂:胎牛血清、原代细胞转染试剂盒、细胞实验检测试剂盒、细胞生长因子、ELISA试剂盒、定量PCR芯片试剂盒、DNA/RNA及细胞裂解物等。
4、细胞系(株):种类丰富(1000余种),已通过STR鉴定;提供细胞株完全培养基。
5、自研产品:支原体检测/qing除试剂盒、端粒酶检测试剂盒、人源/动物源ELISA试剂盒等系列产品。
6、技术服务:绿/红色荧光蛋白标记、荧光素酶标记、慢bing毒介导基因沉默或过表达及稳转株的构建,细菌基因敲除、细胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能学实验。