L15细胞培养基L-15培养液适用于快速增殖瘤细胞的培养,用于在CO2缺乏的情况下培养肿瘤细胞株。此培养液采用磷酸盐缓冲体系,氨基酸组成进一步改良,并由半乳糖替代了葡萄糖。至于选择何种培养基并没有一定的标准,有几点建议可供参考:(1)建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞优先的培养基。可以查阅参考文献,或在购买细胞株时咨询。也可以在一些生物公司的网站上搜索,如Invitrogen网站上有一个CellLineDatabase的工具,选择你感兴趣的细胞类型,它就会弹出推荐的培养基、血清和转染试剂等,有时还有优化好的转染步骤,很方便。(2)其它实验室惯用的培养基不妨一试,许多培养基...
细胞培养基的种类按照细胞培养基的发展历史,细胞培养基大致可分为平衡盐溶液、天然细胞培养基、合成细胞培养基、无血清细胞培养基、限定化学成分细胞培养基等几大种类。BSS主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH稳定及提供简单的营养。其主要用于细胞的漂洗、配制其他试剂等。几种常用的BSS配方如下(表1-1)。D-Hank's与Hank's的一个主要区别是前者不含有Ca2+和Mg2+,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因为Ca2+、Mg2+是细胞膜的重要组成成份,参与细胞粘附等功能,使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免细胞结团。此外,Hanks液和Earl...
体外培养的上皮细胞直接生活在培养基中,因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、、渗透压、pH等诸多方面的要求。一、营养成分维持细胞生长的营养条件一般包括以下几个方面:1、氨基酸:是细胞合成蛋白质的原料。所有细胞都需要12种必须氨基酸:缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸。此外还需要谷氨酰胺,它在细胞代谢过程中有重要作用,所含的氮是核酸中嘌令和嘧啶合成的来源,同样也是合成三、二、一磷酸酰苷所需要的基本物质。体外培养的各种培养基内都含有必需氨基酸。2、单糖:培养中的细胞可以进行有氧与无氧酵解,六碳糖是主要能源。此外六碳糖也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原...
获取细胞系可以通过原代细胞建立自己的培养系,或者也可选择从商业供应商或者非盈利性供应单位(即细胞库)处购买已经建立的细胞系。声誉良好的供应单位可提供质量的细胞系,而且会认真地对细胞系进行检测,以确保其完好性,并且未被污染。我们不建议从其他实验室借用细胞,因为这会带来很高的污染风险。无论来源如何,使用细胞之前都应确保所有新到细胞系已经过支原体污染检测。培养环境细胞培养的一大优势在于能够控制细胞生长的物理化学环境(即:温度、pH值、渗透压、O2和CO2浓度)和生理环境(即:和营养素浓度)。除温度外,培养环境均由生长培养基控制。上海中乔新舟简述 上皮细胞培养基规范标准。欢迎来电咨询上海中乔新舟!浙江...
DMEM细胞培养基DMEM是由Dulbecco改良的Eagle培养基,起初是为小鼠成纤维细胞设计的。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍,维生素浓度是MEM的4倍,采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。初的配方中葡萄糖含量为1000mg/L,后来为了某些细胞的生长需要,将葡萄糖含量又调整为4500mg/L,这就是大家常说的低糖和高糖了。低糖适于依赖性贴壁细胞培养,特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。高糖更适合高密度悬浮细胞培养,也适用于附着性较差,但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养,也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。例如CHO细胞表达...
细胞培养基的类型动物细胞的培养可以使用的培养基或人工/合成的培养基混合一些天然产物。天然培养基天然培养基只由天然生成的生物液体组成。天然培养基非常有用和方便,适用于多种不同的动物细胞培养。但是,由于缺乏对这些天然培养基确切成分的认识,使用天然培养基的主要缺点是可重复性差。人工培养基通过人为地加入一些营养物质(有机的和无机的)、维生素、盐、O2和CO2气体、血清蛋白、碳水化合物、辅因子,制备成人工或合成的培养基[1]。不同的人工培养基被分别设计用于下面的某个用途:1)及时生存(平衡的盐溶液,有特定的pH和渗透压)2)长时间生存(平衡盐溶液辅以各种配方的有机化合物和/或血清)3)不确定...
胸腺上皮细胞培养基:胸腺上皮细胞培养基是专门为正常人类胸腺上皮细胞体外培养设计的适于其生长的培养基。培养基是无菌的、液体培养基,包含必需和非必需氨基、维生素、有机和无机化合物、、生长因子、微量矿物质。该培养基不含血清。该培养基含HEPES和碳酸氢盐缓冲体系,在5%二氧化碳/95%空气培养箱中平衡时PH值为7.4。该培养基在数量上和质量上都保证理想的营养平衡状态,选择性促进体外正常人类气道上皮细胞的生长。胸腺上皮细胞培养基包含500ml基础培养基,5ml气道胸腺细胞生长添加物(TyEpiCGS,Cat.#3962)和5ml青霉素/链霉素溶液(P/S,Cat.#0503).上皮细胞培养基的制作方法...
无污染体外生长的细胞对微生物及一些有害有毒物质没有抵抗能力,因此培养基应达到无化学物质污染、无微生物污染(如细菌、、支原体、病毒等)、无其他对细胞产生损伤作用的生物活性物质污染(如抗体、补体)。对于天然培养基,污染主要来源于取材过程及生物材料本身,应当严格选材,严格操作。对于合成培养基,污染主要来源于配制过程,配制所用的水,器皿应十分洁净,配制后应严格过滤除菌。科研实验中,细胞的体外培养一直是一个重要环节。细胞要养好,就要用好血清,如Ausbian?特级胎牛血清,它适合各种细胞培养,尤其适合难养细胞,如:干细胞、肝细胞,神经细胞,原代培养、细胞融合、转染细胞等。Ausbian?特级...
体外培养的上皮细胞直接生活在培养基中,因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、、渗透压、pH等诸多方面的要求。一、营养成分维持细胞生长的营养条件一般包括以下几个方面:1、氨基酸:是细胞合成蛋白质的原料。所有细胞都需要12种必须氨基酸:缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸。此外还需要谷氨酰胺,它在细胞代谢过程中有重要作用,所含的氮是核酸中嘌令和嘧啶合成的来源,同样也是合成三、二、一磷酸酰苷所需要的基本物质。体外培养的各种培养基内都含有必需氨基酸。2、单糖:培养中的细胞可以进行有氧与无氧酵解,六碳糖是主要能源。此外六碳糖也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原...
合成培养基是根据天然培养基的成分,用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基。早开发的基础培养基(minimalessentialmedium,MEM),其本质为含有盐、氨基酸、维生素和其他必需营养物的pH缓冲的等渗混合物。在此基础上,DMEM、IMDM、HAMF12、PRMI1640等各种合成细胞培养基被不断开发出来。与天然培养基相比,有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代,因此,细胞培养中使用合成培养基时必须加入一定量的天然培养基成分,以克服合成培养基的不足。普遍的做法是添加5~10%的血清,这样才能维持细胞活力,促进细胞增殖。针对不同的动物细胞,现已开发了多种商业化、...
培养细胞的细胞生物学一、基本概念通常,体外培养的生物成分无外乎两种结构形式:其一是小块组织或称为组织块(tissueblock),一般称为外植块;其二是将生物组织分散后制成的单个细胞,一般称为分离的细胞(isolatedcell)或者分散的细胞(dissociatedcell)。分散的过程通常在培养液或平衡盐溶液中进行,分散的细胞被悬浮于培养液或平衡盐溶液中。单个细胞分散存在于培养液或其它平衡盐溶液中、缓冲溶液中,就称为细胞悬液(cellsuspension)。狭义的细胞培养(cellculture)主要是指分离(散)细胞培养,广义的细胞培养的概念还包括单(个)细胞培养(singl...
肺泡上皮细胞培养基:上皮细胞培养基是专门为正常人类肺泡上皮细胞体外培养设计的适于其生长的培养基。是经灭菌的液体培养基,包含必需和非必需氨基酸、维生素、有机和无机化合物、、生长因子、微量矿物质和低浓度胎牛血清(2%)。该培养基缓冲体系为重碳酸盐,在含5%CO2的细胞培养箱中平衡后pH值为。该培养基的配方能够选择性的促进正常人类微血管内皮细胞体外培养中的增殖和生长,并为其达到理想营养平衡状态。肺泡上皮细胞培养基包含500ml基础培养基,10mll胎牛血清(FBS,)、5ml上皮细胞生长因子(EpiCGS,)、5ml青霉素/链霉素溶液(P/S,)。 上海中乔新舟 上皮细胞培养基的优势。欢...
生长培养基可控制培养体系的pH值,为培养的细胞缓冲pH值的变化。这种缓冲作用通常是通过添加有机缓冲盐(例如:HEPES)或者二氧化碳-碳酸氢盐缓冲盐实现。由于培养基的pH值取决于溶解态二氧化碳(CO2)与碳酸氢盐(HCO–)间的精密平衡,因此空气中二氧化碳含量的变化会改变培养基的pH值。为此,使用二氧化碳-碳酸氢盐缓冲盐培养基时必须使用外源性二氧化碳,特别是使用开放式培养皿培养细胞或者进行高浓度的转化细胞系培养时。虽然大多数研究人员通常使用浓度5–7%的二氧化碳,但是4–10%浓度的二氧化碳适用于大多数细胞培养实验。然而,每种细胞的培养条件不一,每种培养基均具有其推荐的二氧化碳压力...
如何选用培养基?选择培养基没有一定标准,有几点建议可供参考:1.建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞优先的培养基。可以查阅文献,或在购买细胞株时咨询。2.根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选1640;进行细胞杂交、基因转移实验,可选择IMDM。3.用多种培养基培养目的细胞,观察其生长状态,可以用生长曲线、集落形成率等指标判断,根据实验结果选择比较好培养基,这是客观的方法,但比较繁琐。(AmericanTypeCultureCollection)收集了绝大多数细胞的详细资料。打开ATCC网页的Cellsandhybridomas链接,输入细胞名称就可以搜...
体外培养的上皮细胞直接生活在培养基中,因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、、渗透压、pH等诸多方面的要求。一、营养成分维持细胞生长的营养条件一般包括以下几个方面:1、氨基酸:是细胞合成蛋白质的原料。所有细胞都需要12种必须氨基酸:缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸。此外还需要谷氨酰胺,它在细胞代谢过程中有重要作用,所含的氮是核酸中嘌令和嘧啶合成的来源,同样也是合成三、二、一磷酸酰苷所需要的基本物质。体外培养的各种培养基内都含有必需氨基酸。2、单糖:培养中的细胞可以进行有氧与无氧酵解,六碳糖是主要能源。此外六碳糖也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原...
M199细胞培养基1950年Morgan等设计的具有确定化学成分的细胞培养液,即M-199。除BSS外,含有53种成分,为多方面培养基,主要用于鸡胚成纤维细胞培养。此培养液必须辅以血清才能支持长期培养。M-199可用于培养多种种属来源的细胞,并能培养转染的细胞。现普遍用于病毒学、疫苗生产。McCoy5A培养基1959年MeCoy为肉瘤细胞设计,BSS+40种成分。可支持多种(如骨髓、皮肤、肺和脾脏等)的原代移植物的生长,除适于一般的原代细胞培养外,主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、HT-29、BHL...
在低血清、无血清细胞培养基中,为满足细胞生长增殖需要,常常添加一些成份:蛋白质、多肽、核苷、嘌呤、柠檬酸循环的中间产物、脂类、及一些血清替代因子等。其中蛋白质具有重要的作用,动物细胞对许多物质(难溶于水的离子或脂类物质)的摄取需要借助蛋白质的传递作用,如白蛋白、传递蛋白、贴壁蛋白等能够携带脂肪酸、、矿物质等促进细胞生长。转铁蛋白是一种重要的传递蛋白,能够结合铁,促进细胞对铁离子的吸收,并具有作用,其促生长作用可能与其具有生长因子的功能有关。胰岛素可促进细胞对葡萄糖和氨基酸的利用,商业化中一些生长因子以重组蛋白形式添加到培养基中,主要用来刺激细胞增殖,并可促进糖元和脂肪酸的合成。乙醇...