qpcr的检测原理：qPCR主要是使用插入染料或荧光探针(例如TaqMan)，利用实时积累的荧光信号监测整个扩增过程，然后通过标准曲线来对未知模板进行定量分析。qPCR 主要是依赖于标准品制备标准曲线，进而去确定未知样品的浓度，因此是一种相对定量的方法。随着PCR的循环进行，染料荧光强度增加，从而检测到定量反应的DNA。SYBR Green是一种DNA插入染料，范围广用于qPCR。虽然SYBR Green方法比探针方法便宜，但是特异性没有荧光探针方法好。q225 加样孔板侧壁和金属热块能够严密贴合，使液体样品迅速达到设定温度，从而减少实验时间。广东Quantagene q225mxqPCR仪仪器

与标准 PCR 一样，SYBR Green 方案由变性、退火和延伸阶段组成。 不同之处在于，您在 qPCR 设置期间将一些双链 DNA 结合染料 SYBR Green I 添加到预混液中。 这种荧光染料在延伸阶段嵌入到双链 DNA 序列中，显示出荧光信号的强烈增加。 在每个热循环结束时测量此信号将使您能够确定存在的双链 DNA 的数量。SYBR Green 检测的缺点是染料会与任何双链 DNA 序列结合。 这意味着您还可以检测非特异性 qPCR 产物（例如引物二聚体）发出的荧光。 为消除这种风险，通过执行熔解曲线分析检查反应特异性，或使用 TaqMan 方法。深圳小巧qPCR仪消毒SYBR Green是一种DNA插入染料用于qPCR。虽然SYBR Green方法比探针方法便宜，但是特异性没有荧光探针方法好。

染色质片段化——DN段化:细胞核材料片段化是获得良好的ChIP 分辨率的关键因素，理想情况下的片段大小在 200 到 800 bp对之间。剪切是难控制的步骤之一。通过超声处理和/或核酸酶/酶促消化可以实现剪切，各有利弊。超声处理需要大量的手动操作时间，但非常适合难以裂解的细胞；酶促消化不需要手动操作，适用于大量样品的处理，但其剪切位点不是随机的。两种方法都需要根据具体细胞系进行优化。注意：此时可以停止ChIP。经过剪切/消化染色质后，可以将样品于-80°C储存。避免反复冻融。

实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种：荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下：1. TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。2. SYBR荧光染料：在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。SYBR与双链DNA进行结合，因此可以通过溶解曲线，确定PCR反应是否特异。3.分子信标：是一种在5和3末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针，两端的核酸序列互补配对，导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近，不会产生荧光。PCR产物生成后，退火过程中，分子信标中间部分与特定DNA序列配对，荧光基因与淬灭基因分离产生荧光。qPCR 反应所需时间取决于反应溶液进行变温所需要的时间，这过程受到加热块升降温速度和液体升降温速度影响。

Quantagene q225 系列荧光定量PCR 系统主要特点：精确定量 以可靠的数据助力您的研究。采用拟合算法计算 Ct 值，定量误差不超过±10%。液体冷却循环系统确保孔间温度高度一致，温差不超过 ±0.15°C。光学系统无运动部件，稳定性增加，长期使用无需校准与维护。的仪器间重复性，不同位置、不同反应体积均不影响定量结果。快速高效 用更短的时间获得更多数据。40 个循环的常规 qPCR 只需43 分钟，较常见qPCR 仪多缩短60% 的时间。在提高速度的同时保持了96 孔的高通量，满足绝大多数实验需求。小巧轻便 节省空间及您的宝贵样品小体积为移动实验和大量部署提供可能。5-10 μl 的推荐反应体积，较常规实验节省80%的试剂用量，更节约您的珍贵样品。PCR反应需要五种关键试剂：PCR模板、DNA聚合酶、引物、脱氧核苷酸三磷酸（dNTPs）、PCR缓冲液。广东Quantagene q225mxqPCR仪仪器

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实时荧光定量PCR（Real-time fluorescence quantitative PCR，qPCR）通过在普通 PCR 反应体系中加入了荧光标记探针或荧光染料，利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物变化。通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。具有专一性更高、可实时监控、可重复精确定量等优势。qPCR的种类根据qPCR的化学发光原理一般分为2大类：一类是探针法，利用与靶序列特异杂交的探针来指示扩增产物的增加；一类是基于SYBR Green I 的染料法，通过荧光染料来指示产物的增加。广东Quantagene q225mxqPCR仪仪器

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