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医疗系统认证数字PCR生命科学用品

来源: 发布时间:2023-04-07

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面对日益严格的限量标准和可预期降低的仪器购置成本,数字PCR将在食品检测领域起到越来越重要的作用:同时,数字PCR技术带来的量值的溯源方式,也将成为转基因标准物质的主要研究方向。发展dPCR协同分析和自动化程度,使其具有更好兼容性、更低廉的成本,可使数据结果不间断地纳入到全食品安全全产业链中,从而在未来的食品检测中得到更广的应用。dPCR多重检测可在不使用标准曲线的情况下,在同一分析过程中同时测定单一或多个转基因与参考基因的比率,提高检测的效率节省重复操作。广东锐讯数字PCR试剂盒数字PCR等新兴技术要在临床应用上得到爆发式增长,有赖于LDT市场的放开。

PCR已成为分子诊断领域重要的技术手段之一,占据分子诊断市场的半壁江山。数字PCR是一代PCR技术,也是当前灵敏度和定量精度比较高的分子检测技术。但数字PCR使用成本仍然相对较高,检测靶点数少(一般≤6靶点/反应),阻碍了其在临床中的大规模应用,提高数字PCR的多重检测能力迫在眉睫。基于荧光通道数的增加和基于探针浓度梯度增加,均可以在一定程度上提高数字PCR检测重数,然而只能达到"线性"增加的目的。基于探针浓度梯度的多重检测技术虽然光'f明显增加多重能力,但由于无法避免交叉反应现象,不能确保获得位点特异性的分簇,因此稳定性不足、灵敏度较差,难以满足临床级别的数据要求。而基于创新的且数字PCR独特适用的荧光编码技术可以实现“指数”级的多重检测,颠覆性的提高数字PCR检测重数,覆盖临床应用多场景需求。

在使用dPCR进行转基因检测时,通常直接参照qPCR的方法。使用不同技术对相同样品检测时,两种方法的灵敏度是否具有可比性成为关注的问题。Burns等21]使用Fluidigm公司的12.765(12板,每板765个微单元)芯片数字PCR分析仪测定标准物质ERM-AD413检测转基因玉米MON810。该小组应用dPCR技术评估在qPCR定义下的灵敏度数值,在拷贝数200-700之间,dPCR与qPCR的测量结果具有一致性。但与qPCR的灵敏度相比,dPCR在低于拷贝数200时有被低估的风险,在高于拷贝数1000时有被高估的风险。dPCR在同一阵列上同时测量转基因和内源性靶点时,需要稀释内源性靶点和转基因靶点在合理拷贝数范围内以保证dPCR测量结果的准确性。通过创新技术微流控芯片,让数字PCR单反应耗材价格进入个位数,实现了新的进步,也降低开发难度。

在定量PCR时,我们常常纠结一个问题,究竟是相对定量还是***定量呢?如今,你无需纠结了,因为数字PCR(digitalPCR)来了。尽管这两种技术有些类似,都是估计起始样品中的核酸量,但它们有一个重要的区别。定量PCR是依靠标准曲线或参照基因来测定核酸量,而数字PCR则让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的***定量。因此特别适用于依靠Ct值不能很好分辨的应用领域:拷贝数变异、突变检测、基因相对表达研究(如等位基因不平衡表达)、二代测序结果验证、miRNA表达分析、单细胞基因表达分析等。使用数字PCR技术对436例非小细胞肺*样品进行检测,并挑选样本验证一致性。美国数字PCR原理

数字以灵敏度和准确度测量突变的变异程度、检测稀有的DNA靶拷贝以及解析拷贝数变?异状态。医疗系统认证数字PCR生命科学用品

常规PCR和实时荧光PCR定量检测都需要已知拷贝数的标准DNA制定标准曲线,由于样品测定在各种条件上不会完全一致,会造成PCR扩增效率的差异,从而影响定量结果的准确性。而ddPCR不受标准曲线和扩增动力学影响,可以进行定量。如何在双通道设置及双探针标记的情况下实现多重检测?不同位点的双探针检测体系中引物和探针采用不同的终浓度,这样阳性微滴的终点FAM/HEX荧光信号强度就会不同,利用阳性微滴不同的“分簇(cluster)”来区分不同的突变位点。采用对应的KRAS野生型和突变型细胞系对双重ddPCR检测体系的性能进行验证。结果显示除了Q61H位点外,其他位点的检测体系在54C的情况下均能很好的区分4个明显的cluster。医疗系统认证数字PCR生命科学用品

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