伊人网91_午夜视频精品_韩日av在线_久久99精品久久久_人人看人人草_成人av片在线观看

CCK8，即Cell Counting Kit-8，与MTT法的主要区别如下：一、原理不同1、Cell Counting Kit-8：CCK-8 试剂盒利用了日本同仁化学研究所（Dojindo）开发的四唑盐WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)。2、MTT法：其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范...

一直都像个新手，从未老道过。所有新手的迷茫与无奈我**能体会。看到园子里有一些同学在问有关CCK8试验的事情，当初我也和他们一样，像个被蜘蛛丝缠住头的迷茫苍蝇一头扎进园子里，期待能找到些解决谜团的只言片语。希望我写的这些非专业文字能够帮助那些在实验室里没有前行者指点迷津的筒子们。当然仁者见仁智者见智，我写的只是个人实验心得，就供参考。欢迎大家拍砖共同进步。实验是简单的，道路是曲折的，时间就是用来浪费的，科研就是自娱自乐使劲折腾。**药敏试验：这个是用的比较广的，我见过做**的团队，买CCK-8都是一整箱，一整箱的买。上海同仁化学研究所 cck8 、***浓度的确定需要做一个时间梯度，铺板和上...

CCK8的优点：方法方便，不用洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；CCK-8快速检测；CCK-8检测灵敏度高，细胞密度低也可以检测；CCK-8的重复性优于MTT法；CCK-8对细胞的毒性很小；CCK-8细胞活性检测试剂中是1瓶溶液，不需要现用现配，即开即用。CCK8的缺点：相比于与MTT法，CCK8的价格比较昂贵生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。用途：***筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、**药敏试验。代谢率低了以后，细胞呼吸减弱，NAD+产生减少，测出的Formazan也会减少。上海dojindo cck8说明书没有做过MTT实验，但...

细胞增殖实验就是对细胞生长的测定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式检测。阅读大量文献发现，如果想证明一个***或者说是一个作用条件对细胞生长的影响，基本上大家都采用MTT或CCK8结合流式的双标准来证明作用效果。所以，***先给大家介绍一下MTT和CCK8比色法的实验操作和注意事项。MTT实验操作1、在96孔板中培养细胞，设置对照组（细胞+无血清培养基）、实验组和空白组（无血清培养基），可以采用如下图的排版方式：2、在对照组和实验组中，生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比.上海cck8检测细胞增殖步骤实验材料及试剂96孔板、CO2培养箱、酒精灯、移液***、酶标仪等；细胞、CCK8等。实...

CCK8检测细胞增殖和毒性实验佰欧晶生物专注于生命科学、医学及药学科研咨询和技术服务，致力于疾病关键基因功能研究，中药功能及机理研究，纳米靶向***研究，**研究整体方案服务。CellCountingKit-8（简称CCK-8）试剂用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazandye）。生成的甲瓒物的数量与活...

当使用标准96孔板时，贴壁细胞的**小接种量至少为1000 个/孔(100μl培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2500 个/孔(100μl培养基)。酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰，可以通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去。 注意事项CCK8可以检测大肠杆菌，但不能检测酵母细胞。在细胞增殖实验每次测定的过程中需要避免细菌污染，以免影响结果。CCK-8在0-5℃下能够保存至少6个月，在-20℃下避光可以保存1年。当在培养箱内培养时，培养板**外一圈的孔**容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，**外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。在培...

CCK8检测细胞增殖/毒性的方法： 1.将处于对数生长期的各实验组细胞胰酶消化后，完全培养基重悬成细胞悬液，并计数。 2.根据细胞生长快慢决定铺板细胞密度（多数为1000-2000 cell/well），每组3-5重复，每孔100-200μl培养基。根据实验设计决定铺板数量（如需要检测5天，则铺5张96孔板），我们以1000 cell/well，5复孔，200μl培养基，检测5天为例，各实验组需要细胞数量为1000×5×5个细胞，从计数好的细胞悬液中取出所需的细胞量和完全培养基混匀，**终体积为200×5×5μl。 CCK-8试剂中含有WST–8.湖北cck8检测毒性统计学处理...

再此，给大家分享个小事情，有次，因为实验时间点已经到，但是盒子不够，我们就用了某天的CCK-8试剂盒，***出来的结果如图3。这个结果是我所不能接受的。后来用Sigma的再重复了一次，如图4，这种有深有浅的才是该有的结果。我想说的是在有能力选择范围内，尽量选择好一点的试剂，免得浪费时间。后来博士换了导师，换了课题，没有再用Sigma的了，用了一个日本的牌子，名字和货号如下，结果只能说justsoso，肯定没有Sigma的好用。二次在电子耦合试剂（也就是细胞是活的，有呼吸，有能量代谢）.上海cck8结果统计。一般情况下，**外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。在培养基中加入CCK8，培养一定的...

在做每个东西之前，都要搞清楚这个东西是什么。CCK-8的英文全称是Cell Counting Kit-8，也就是进行细胞计数的一个盒子。那它的用途也就大致可以猜到，和细胞增殖相关的实验都可以。CCK-8的原理在CCK-8试剂盒中，**主要的化学药品是WST-8，化学名为2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐。它的**基团和MTT是一样的，是MTT的升级版本。在电子耦合试剂（也就是细胞是活的，有呼吸，有能量代谢）存在的情况下，可被NAD+氧化还原成为水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan)。活细胞越多，产生的Formazan就越多，颜色...

细胞增殖实验就是对细胞生长的测定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式检测。阅读大量文献发现，如果想证明一个***或者说是一个作用条件对细胞生长的影响，基本上大家都采用MTT或CCK8结合流式的双标准来证明作用效果。所以，***先给大家介绍一下MTT和CCK8比色法的实验操作和注意事项。MTT实验操作1、在96孔板中培养细胞，设置对照组（细胞+无血清培养基）、实验组和空白组（无血清培养基），可以采用如下图的排版方式：2、在对照组和实验组中，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基).浙江cck8测的是什么 CKK-8原理 CellCountingKit，CCK-8试剂含有WST-8（化学...

贴壁生长的时间我一般就直接让它贴壁长24h了，这个时间细胞已经贴壁完全，而且这样设置时间对自己安排实验时间也方便。没人愿意大半夜爬起来做实验吧。3、加药后的孵育时间，我的实验摸了3个时间，24h，48h，72h。然后根据数据的稳定性（RSD）、OD值的范围（1.0左右）这些来选择比较好的时间。太长了就没有必要了，细胞呆在孔里几天不换液结果可想而知了。4、CCK8试剂加入量，说明书中明确写出建议加入量为培养基体积的10%。这里有一个问题：假设我要孔内是200微升的体系，即细胞悬液+药液+CCK8=200微升呢，还是细胞悬液+药液=200微升，cck8不算在体系内呢。关于这一点文献报道不一致。本人...

CCK-8的用途1.细胞增殖测定：细胞增殖实验在很多领域都会用到，比如**相关、损伤后修复等。2.***筛选：在测定一个***的毒性和安全有效浓度时，经常会用到CCK-8。3.细胞毒性测定：这个可以和各个处理因素对细胞活性和增殖的影响，比如在UV、低氧或者什么化学物品对细胞的影响上。4.**药敏试验：这个是用的比较广的，我见过做**的团队，买CCK-8都是一整箱，一整箱的买，比如果子老师所在的团队，哈哈哈。5.微生物对细胞的毒性或增殖的实验在电子耦合试剂（也就是细胞是活的，有呼吸，有能量代谢）.江苏mtt与cck8的波长细胞增殖-毒性检测1.在96孔板中配制100ml的细胞悬液。将培养板在培养...

摸条件包括1、种板数；2、种板后细胞的贴壁生长时间；3、加药后的孵育时间；4、cck8试剂加入量；5、cck8试剂加入后细胞孵育时间。看起来很多，其实这就是一个实验。而且都是种的空白板，也就是不加药物，只加细胞和CCK8。我没有做过MTT实验，但其实原理及目的都是一样的（反应机理不一样）。都说CCK8简单点而且数据更稳定，所以就用了这个试剂盒。 当然仁者见仁智者见智，我写的只是个人实验心得，但供参考。欢迎大家拍砖共同进步。实验是简单的，道路是曲折的，时间就是用来浪费的，科研就是自娱自乐使劲折腾。 细胞增殖检测——CCK8.天津cck8是什么CCK-8没有具体规定反应时间的长短...

读数前可在摇床上温柔混匀，酶标仪在 450nm 波长处检测每孔的吸光度。 ***率（％）= [（对照孔吸光度-实验孔吸光度）/（对照孔吸光度-空白孔吸光度）]×100=IC50 注意事项 CCK8法检测细胞生长情况基于的原理是脱氢酶催化的反应，如果实验处理条件中存在还原剂的影响，应事先去除。如果实验条件中存在还原物质，需单独测定还原物质的空白吸光度。如果还原物质的吸光度很小，可以忽略不计；但如果吸光度很大，则需要去除培养基，再用培养基洗涤细胞3次，然后再加入新的 100ul培养基和10ul CCK-8 溶液进行检测。 在CCK-8试剂盒中，**主要的化学药品是WST-8....

CCK-8盒子的选购还记得***次做CCK-8的实验时研究生二年级的时候，当时用的***个盒子是Sigma的，当时的Sigma-Aldrich就是Sigma-Aldrich，还不是现在的Millipore-Sigma。那个盒子给了我莫大的鼓励，因为在那之前做分子克隆一直都不是很顺利。这个盒子是我的硕士老板从美国带回来的，品质有保证，***的结果也是很好的。后面在做CCK-8的实验时，我们在有选择的情况下都会买sigma，下图2是sigma官网的截图。其实也不贵，只是到货时间太慢。细胞毒性测定：这个可以和各个处理因素对细胞活性和增殖的影响，比如低氧或者什么化学物品对细胞的影响上。天津cellti...

CCK8原理、优势和步骤 检测原理： ◆ Cell Counting Kit简称CCK试剂盒，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。 ◆ WST-8属于MTT的升级产品，工作原理为：在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。 CCK-8试剂中含有WST–8.江苏cc...

氧化还原试剂对CCK8测定的影响：CCK8是一个氧化还原反应实验，在整个操作当中，如果有氧化还原试剂都会影响**终的结果。当有还原性物质存在时会影响CCK8的测定，增加OD值。在有氧化性物质存在时会***测定反应的发生，减少OD值。在高中化学我们就知道金属是氧化还原反应中的重要参与者。各个公司都会告诉你：“终浓度为1mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会***5%、15%、90%的显色反应，使灵敏度降低。如果终浓度是10mM的话，将会*****。”我**开始看到这句话时很懵，因为不知道在操作中怎样会遇到这种情况。下面就分享我能想到或者在操作中真实遇到的。cck8试剂盒价格是多少?上海cck8结果图怎...

经验总结及分享： CCK8的说明书大家一定要认真阅读，里面很多细节的问题都有提到。而且说明书里提供的一些关于各种细胞的种板数都很有参考价值，因为那是反复验证过的比较好数值。但无论如何，做这个试验一定要摸条件。你就算再懒，这个懒不得，否则你都只是在做无用功。以下言论全部以细胞毒性试验为前提， 如果你做的是促进细胞生长的***的药效实验那就另当别论了。 摸条件包括1、种板数；2、种板后细胞的贴壁生长时间；3、加药后的孵育时间；4、cck8试剂加入量；5、cck8试剂加入后细胞孵育时间。看起来很多，其实这就是一个实验。而且都是种的空白板，也就是不加***，只加细胞和CCK8。 在电...

贴壁生长的时间我一般就直接让它贴壁长24h了，这个时间细胞已经贴壁完全，而且这样设置时间对自己安排实验时间也方便。没人愿意大半夜爬起来做实验吧。3、加药后的孵育时间，我的实验摸了3个时间，24h，48h，72h。然后根据数据的稳定性（RSD）、OD值的范围（1.0左右）这些来选择比较好的时间。太长了就没有必要了，细胞呆在孔里几天不换液结果可想而知了。4、CCK8试剂加入量，说明书中明确写出建议加入量为培养基体积的10%。这里有一个问题：假设我要孔内是200微升的体系，即细胞悬液+药液+CCK8=200微升呢，还是细胞悬液+药液=200微升，cck8不算在体系内呢。关于这一点文献报道不一致。本人...

CCK法的操作步骤（更多内容请见说明书）：实验一：细胞活性检测1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（37℃,5%CO2）。2、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。5、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。CCK8虽好,这些情况下不建议用!浙江cck8统计方法小木虫注意事项1、细胞密度：MTT要检测的只是细胞的增殖能力...

1、种板数：这个要查文献，看你所用细胞别人有无做过，把范围大致找出。记住还要参考说明书，这个很重要。然后稀释一系列浓度种板。首先你要观察多长时间细胞可贴壁完全，一般贴壁生长24小时。然后还有在你的实验时间内，不同细胞数下孔内生长情况。比如我拟定考察4天的时间，那么在4天内，细胞是刚好铺满还是堆积生长？因为每块板都会设置对照孔，也就是含有细胞的培养基+CCK8，这个数值是板上的比较大数值，CCK8试验比较好OD值在1.0附近，所以这个比较大数值比较好能控制在1.0左右。我的实验经验是不要让细胞长满，一旦长满了很难去判断是否堆积生长了，对***能否顺利进入细胞有影响此为其一，其二生长不均匀易导致孔...

细胞增殖实验就是对细胞生长的测定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式检测。阅读大量文献发现，如果想证明一个***或者说是一个作用条件对细胞生长的影响，基本上大家都采用MTT或CCK8结合流式的双标准来证明作用效果。所以，***先给大家介绍一下MTT和CCK8比色法的实验操作和注意事项。 MTT实验操作 1、在96孔板中培养细胞，设置对照组（细胞+无血清培养基）、实验组和空白组（无血清培养基），可以采用如下图的排版方式： 2、在对照组和实验组中，每孔加入细胞悬液100ul,培养24小时； 向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。...

细胞增殖-毒性检测1.在96孔板中配制100ml的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(在37℃，5%CO2的条件下)。2.向培养板加入10ml不同浓度的待测物质。3.将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6,12,24或48小时)。4.向每孔加入10mlCCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响O.D值的读数)。5.将培养板在培养箱内孵育1-4小时。6.用酶标仪测定在450nm处的吸光度。7.如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。注意：如果...

cck8试剂加入后孵育时间，随着时间的增加，OD值就会增大。总之原则就是把OD值控制在1.0左右。这里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。 再说一下关于种板设置问题。众所周知周围一圈孔因为边缘效应都是不用来做实验的。一般每组样品我会设置6个复孔，得到的OD值去掉**大值与**小值，其余取平均值。我用的是排***，会省很多力气，但是也会增大组内误差。这个只有通过校正移液***和选用**适***头了。 能力有限，表达不清的大家凑合着看看吧。有疑问的欢迎大家留言讨论，我们的目标是共同进步，哈哈。 主要是重复性优于MTT；江苏cck8统计分析没有做过MTT实验，但其实原理及目的都是一...

在细胞培养箱内继续孵育1-4小时，对于大多数情况孵育2小时左右就可以了。6.用酶标仪测定在450nm处的吸光度（使用酶标仪之前要提前开启10min预热）测定完成后，保存数据。7.连续五天检测，每天保持一样的时间点加入CCK-8溶液，在培养箱内孵育时间相同。注：若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉***影响。当然***影响比较小的情况下，可以不更...

注意事项1、细胞密度：MTT要检测的只是细胞的增殖能力，所以不用保证孔内细胞铺板一定要均匀，只要保证孔与孔之间的细胞数量大致相同就可，也因此细胞重悬很重要。每孔加入之前，都需要吹打混匀细胞，但即便如此也很难保证每个孔的细胞数量大致一致。所以我们设置了6组实验组，以便计算结果时可以有所取舍。2、对于MTT而言，预实验很重要。预实验要摸清楚两点：a)细胞该如何稀释；b)***浓度。网上很多人建议将细胞数稀释到某个数值才是**合适的，但我认为只要保证每个孔内的细胞数在70%左右，且各个孔内细胞数量大致相同就可，不需要强求一定要达到某个数值，现实中，这一步需要多次摸索。那它的用途也就大致可以猜到，和细...

CCK8检测原理图2操作步骤1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（37℃,5%CO2）。2、细胞处理（不同实验处理方式不同）。3、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。4、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。5、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。6、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。浙江cck8的价格细胞活性...

CCK8检测细胞增殖/毒性的注意事项：1.加入CCK8溶液时不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数；2.要设计空白对照组；3.对于大多数情况，加入CCK8溶液后，孵育2h左右就可以了；4.使用酶标仪之前要提前开启10min预热；5.若连续多天检测，必须保持所有条件一致。相关链接：CCK8的特性、保存方法以及与BrdU的区别CCK8空白对照，测定参比波长的设定以及OD值的合适范围CCK8标准曲线、检测时间、终止反应以及减少加样误差的方法外界因素(金属/***/细菌/培养基/培养板)对CCK8测定的影响细胞因素(预培养/生长方式/状态/细胞数/死细胞)对CCK8测定的影响细胞增殖到底用MTT还...

培养基对CCK8测定的影响：不同的培养基中含有氧化还原性物质不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量），会与CCK8发生反应，产生实验误差，因此所用培养基要一致，不要更换其他培养基。比如DMEM空白吸收为0.93；1640培养基在0.5左右。另外培养基中有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可，可见空白孔非常重要，所以每次实验均要设定空白对照。另外，血清不影响测定，所以我用CCK-8来测定病毒对细胞活性的影响或者某个***对病毒复制的影响时，我都小心翼翼的测很多个时间点，说实话，效果不是很好。所以我比较喜欢中性红。水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞.北京cck8 od值...

CCK8，即Cell Counting Kit-8，与MTT法的主要区别如下：一、原理不同1、Cell Counting Kit-8：CCK-8 试剂盒利用了日本同仁化学研究所（Dojindo）开发的四唑盐WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)。2、MTT法：其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范...