用LipoFectMax?转染Hela细胞,左图转染GFPcDNA,右图共转染GFPCDNA和GFP靶向siRNA。转染siRNA后可以从右图明显看到基因沉默。4适用于神经细胞的转染图4.用LipoFectMax?和LipoFectamine®2000分别对小鼠神经元细胞进行转染绿色荧光白蛋白(GFP),转染24小时后观察转染效果,LipoFectMax?转染效率(左图)比LipoFectamine®2000(右图)高5倍。LipoFectMax?转染试剂转染试剂操作流程细胞毒性低图2.LipoFectMax?,LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分别对A549细胞进行转染操作,通过计算转染后的细胞存活率比较细胞毒性.CycloFect转染试剂,你了解多少?动物细胞转染试剂报价
用 LipoD293? 体外 DNA 转染试剂(Ver. II)(上图)和受欢迎的品牌产品 Invitrogen 公司的 293fectin?(下图)转染 pEGFP-C1 质粒到 HEK293 细胞中。转染 24 小时后,细胞的尼康 Eclipse 荧光显微镜 DIC 成像图(左侧)和荧光成像图(右侧)。
对悬浮 HEK293F 产生蛋白质效率的比较/
30 毫升的 293F 细胞分别使用 LipoD293?试剂、293fectin、Xfect 和 Fugene 6 等转染试剂按照生产商的标准转染步骤将 pEGFP-6xHis 质粒导入细胞表达,用量为 LipoD293? 试剂,20 微克,所有其他三种转染试剂均使用 30 微克质粒 DNA。 病毒转染试剂原理用了这个转染试剂,慢***再也不用怕转不进去了!
.在多种不同类型细胞中基因敲除效率超过90%。
2.高灵活应用, 同一试剂可用于siRNA和质粒共转染的基因沉默实验。
3.细胞毒性低,结果相关性好,确保所观察到的细胞效应是由转染的siRNA而非转染过程本身介导。
4.兼容含血清或不含血清的培养基,转染前后均无需换液(如无血清培养基)。
图4. X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent用于4种细胞系的HPRT基因沉默实验。根据各试剂说明书建议的操作流程,或标准实验方法,将100nM HPRT特异性siRNA转染至4种细胞。 通过LightCycler® h-HPRT Housekeeping Gene Set的荧光定量法评估基因沉默效率。结果显示用罗氏这款试剂在四种细胞中转染后基因沉默表现均表现优异。
基于磷酸钙成分的转染试剂,其主要作用原理是与DNA通过沉淀反应形成磷酸钙-DNA复合物,粘附到细胞膜表面,借助内吞作用进入细胞质。pH值,钙离子浓度,DNA浓度,沉淀时间,细胞孵育时间乃至各组分加入顺序都可能对结果产生影响,因此实验条件摸索和优化时间较长,且重复性不佳。基于脂质体的转染试剂包括中性脂质体和阳离子脂质体两种。中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA,借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。目前应用比较***的是带正电的阳离子脂质体转染试剂,DNA并没有预先包埋在脂质体中,而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上,形成DNA-阳离子脂质体复合物,从而吸附到带负电的细胞膜表面,经过内吞被导入细胞。此方法操作简单,重复性好,在体外转染中有很高的效率,但具有一定的细胞毒性,可能会干扰细胞的代谢。且活性受血清影响,需要去除血清。转染的细胞类型可简单分为两大类,连续细胞系和原代细胞。
图5.Invivofectamine3.0试剂与靶向FVII的siRNA在单次静脉注射后可在肝脏中引起剂量反应的敲低现象。Invivofectamine3.0试剂与靶向FVII的AmbioninvivosiRNA以0.02到2mg/kg的剂量进行注射。随后分离血清并检测FVII蛋白的水平(Biophen显色检测)。持续敲低能力在单次注射后可观察到更长的敲低时间图6.使用三种不同浓度的靶向FactorVII(FVII)的siRNA研究剂量效应。siRNA分子与Invivofectamine3.0试剂形成复合物后分别以1、0.5、及0.25mg/kg的剂量进行注射。在第2、5、9、16、23及30日收集血清,并使用显色法对血清进行分析以确定FVII蛋白的敲低效果。低毒性该试剂可将RNA导入多种细胞系,包括原代细胞和悬浮细胞.核酸转染试剂价格
用于siRNA的转染试剂,还有通用型转染试剂Lipofectamine?.动物细胞转染试剂报价
基于阳离子聚合物的转染试剂,带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用,并通过内吞作用进入细胞。其又分为树枝状阳离子聚合物和线性阳离子聚合物两类,前者细胞毒性相对较大,后者细胞毒性较小,但其转染效率都高于脂质体转染,适用也较为广范。以上单一成分的转染试剂或聚焦于提高效率或着重于降低细胞毒性,可谓鱼和熊掌不可兼得也。新一代转染试剂,不局限于单一成分,混合了不同 配方的脂类(非脂质体)、加上蛋白质组分、以及各种的 成分,兼具了转染效率高和细胞毒性小的优势,且操作更加简单,易于高通量。动物细胞转染试剂报价
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