细胞爬片免疫组化检测实验步骤

1、选择贴壁良好的细胞爬片，用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干。

2、PBS洗3次，每次5min。3、切片放入3%过氧化氢溶液，室温下孵育10min，以阻断内源性过氧化物酶。

4、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封闭20min（封闭电荷）。

5、去除BSA液，每张切片加入50μl稀释的一抗覆盖组织，4℃过夜。

6、PBS洗3次，每次5min。

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7、去除PBS液，每张切片加50μl-100μl相应种属的二抗，4℃孵育50min。

8、PBS洗3次，每次5min。

9、去除PBS液，每张切片加50-100μl新鲜配制DAB溶液，显微镜控制显色。

10、显色完全后，蒸馏水或自来水冲洗，苏木素复染，1%盐酸酒精分化（1s），自来水冲洗，氨水返蓝，流水冲洗。

11、切片经过梯度酒精（70-100%）10min一个梯度，脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。 免疫组化结果分析是什么？细胞免疫组化多少钱

免疫组化实验注意事项总结：

?本实验室所用切片一般是石蜡切片。

?烘片：使蜡片水分蒸发，石蜡软化，组织切片牢固贴在玻片上；烘片至跟烘片前透明度有差异。

?抗原修复时，使片子始终浸没在修复液中，液体不能干。

?一抗孵育在37度培养箱，湿盒放置1h，省时间和结合效果好，不要超过1h，容易过染。

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?二抗使用：两个二抗放大信号或一个二抗；若抗体信号强，可不用放大信号，尽量增大信噪比。

?10XDAB在常温溶解，尽可能现用现配，放于4度储存时间久了效果不佳。

?复水和脱水时所用的梯度酒精不可混用，要区分开。

?加抗体和显色液时，都要将片子甩干，在半干半湿的状态下再加，不然容易造成溶液的二次稀释。

?整个操作过程中在显色之前，一定不能干片。 辽宁组织免疫组化推荐免疫组化失败的原因？

关于免疫组化的封闭：用和二抗来源一致的血清在保湿盒中于37℃孵育15~30min，然后甩去封闭用血清，勿洗；注意：封闭时间根据具体实验调整；封闭液一般选用5%BSA或与二抗来源一致的血清，切记是BSA，不是PBS.很多论坛写的是PBS,太坑了。①使用血清好还是BSA好？答：***是待检样本会非特异性的和蛋白结合，从而导致背景过高，因此可以用BSA或血清封闭掉这部分非特异性的结合，从这点看，BSA和血清没有明显区别。第二是待检样本中可能会有Fc受体，可以和抗体恒定区结合，与抗体特异性无关，封闭血清中有抗体，因此用血清可以封闭掉一抗及二抗和样本Fc受体之间结合。BSA则无法封闭Fc受体。

免疫组化技术应用于临床cancer良恶性的判断，英瀚斯生物为您介绍。对于反应性增生还是cancer性增生，可用免疫球蛋白(Ig)的轻链抗体检测B淋巴细胞增生的单克隆或多克隆性来区别。在滤泡反应性增生时，滤泡反应中心的细胞不表达细胞凋亡蛋白(bcl-2)，bcl-2阴性;而在滤泡性淋巴瘤中，由于90%以上cancer性滤泡细胞有bcl-2的高表达，bcl-2阳性。而增殖细胞核抗原(PCNA)，周期素(Cycling)，核抗原(Ki-67)通过对cancer细胞增生的程度作出评价，从而提示增生细胞的良恶性。免疫组化怎么做？步骤方法？

确定来源不明的转移瘤的原发部位，临床上免疫组化也可以进行操作。对于来源不明的转移瘤，用免疫组化技术有助于确定恶性cancer的组织学来源，进一步确定原发部位。如角蛋白抗体(CK20)在胃肠道cancer、胆管cancer、胰腺cancer中阳性，而在肺cancer、乳腺cancer、肾cancer中阴性;Tg阳性可考虑甲状腺转移;波形蛋白(Vimentin)阳性支持肉瘤的诊断;前列腺特异性抗原(PSA)阳性可考虑前列腺转移;甲状腺球蛋白阳性可考虑甲状腺滤泡细胞cancer;肌动蛋白(Actin)、肌球蛋白(Myosin)、结蛋白(Desmin)、肌红蛋白(Myoglobin)阳性可考虑横纹肌肉瘤;S-100蛋白阳性支持黑色素瘤的诊断;等等这些都为cancer的医疗及预后提供了依据。做免疫组化的目的是什么？青海大鼠免疫组化是什么

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免疫组化（IHC）利用抗体检测组织切片中蛋白质和其他抗原的定位。

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抗体-抗原的相互作用通过有色酶底物显色检测或荧光染料荧光检测进行观察。虽然IHC在定量方面不如蛋白质印迹或ELISA，但是IHC可以提供完整组织中蛋白定位的宝贵信息。蛋白表达谱对病理学家以及作为诊断工具都具有重要意义。

IHC实验成功的关键在于稳定、优化且可重复的染色方案，而该方案应使用高质量的特异性试剂。 细胞免疫组化多少钱