精确的方法当数 ＤＮＡ 测

序技术，但存在耗时长、费用高等缺点的限制，无法应用于临床

进行常规 检 测。现 常 用 方 法 仍 是 ＰＣＲ、ＲＦＬＰ、ＳＳＣＰ 等 技

术。在早期采用的方法是 ＰＣＲ 扩增之后直接电泳，比 较 电 泳

图谱差异进行细菌种属的鉴定；如果 ＰＣＲ产物单一，可以利用

ＲＦＬＰ得到不同的酶切片段加以分析或单链构相多态性（ＳＳ－

ＣＰ）加以区分。而１６ｓ～２３ＳｒＲＮＡ 基 因 间 区 与 某 些 基 因（如

ｍｅｃＡ 基因、ｏｍｐ２５和ｏｍｐ３１基因等）联合进行细菌鉴定，与电

导技术相结合或与人工神经网络技术（ＡＮＮ）相结合进行细菌

鉴定等均可提高鉴定的灵敏度和特异度。 18S 多种测序供您选择。全长16S测序服务

在真核微生物中，核糖体 DNA 是由核糖体基

因及与之相邻的间隔区组成，其基因组序列从 5′到 3′依次为：外部转录间隔区(external transcribed

spacer，ETS)、18S rRNA 基因、内部转录间隔区 1

(ITS1)、5.8S rRNA 基因、内部转录间隔区 2 (ITS2)、

28S rRNA 基因和基因间隔序列(intergenic spacer，

IGS) 。其中，18S rRNA 基因是编码真核生物

核糖体小亚基的 DNA 序列，其中既有保守区，也

有可变区(V1?V9)。与 16S rRNA 基因相似，保守区

反映了生物物种间的亲缘关系，而可变区则能体现

物种间的差异，适用于作为物种分类单元及系统发

育的分子标记。在中，相比于 rRNA 中的 18S、

5.8S 和 28S 的基因组序列，内转录间隔区 ITS1 和

ITS2 作为非编码区具有更高的丰富度和分辨率，承

受的选择压力较小，相对变化较大，并且能够提供

详尽的系统学分析所需要的可遗传性状。 全长16S测序服务上海融享生物科技有限公司测序的16s 怎么样？

rRNA 结构既具保守性又具高变性。保守性反映生物物种的亲缘关系, 高变性则揭示生物物种的特征核酸序列, 是属种鉴定的分子基础。 16S rRNA 基因大小适中, 约 1.5Kb 左右, 含有高 度保守的基因片段, 同时在不同的菌株间也含有 变异的核酸片段。因其既能体现不同菌属之间的 差异, 又能利用测序技术快速得到核酸序列, 已成 为理想的基因鉴定靶序列。通过对其序列的分析, 可以判定不同菌属、菌种间遗传关系的远近。细菌 的 16S rRNA 可变区位点结构如下: 可变区序列 因不同细菌而异, 恒定区序列基本保守, 所以可以 利用恒定区序列设计引物将 16S rRN**段扩增 出来, 利用可变区序列的差异来对不同菌属、菌种 的细菌进行分类鉴定。但较其它方法而言, 16S rRNA 序列测定分析更适用于确定属及属以上分 类单位的亲缘关系。

P Kaufmann 等用 16S rRNA 探针杂交技术 和 PCR 技术定量鉴定了分离自食物中的 30 株双 歧杆菌。1997 年, D Mora 等利用套式 PCR 方法扩 增 16S rRNA 序列和一段 D- 乳酸脱氢酶基因, 对 乳酸片球菌( Pediococcus acidilactici) 和戊糖片球 菌( Pediococcus pentosaceus) 进行了鉴定。后来, P Parola 等( 1998 年) 又利用 16S rRNA 基因序列 分析技术从败血症患者术后区域成功地分离 出干酪乳杆菌。1998 年, T Matsuki 等利用 16S rRNA 序列分析快速鉴定了人肠道中的 46 株双 歧杆菌。1998 年, R Patel 等应用 16S rRNA 序列 分 析 将 一 株 鸡 肠 球 菌 鉴 定 到 种 。1999 年 , GW Tannock 等利用 16S- 23S rRNA 间区序列的比较 分析分别对分离自胃肠道、青贮饲料和酸奶中的 40 株乳杆菌进行了鉴定。2000 年, MJ Kullen 等 利用细菌 16S rRNA 的包括可变区 V1 和 V2 的 500bp 长度片段序列快速准确地从人肠道混合物 中鉴定出嗜酸乳杆菌。在 2000 年, 黄锡全等对一 株明串珠菌的 16S rRNA 基因序列进行分析, 并 与其它 21 株乳酸菌 16S rRNA 基因序列进行了 同 源 性 比 较 , 与 柠 檬 色 明 串 珠 菌 的 同 源 性 为 99%, 认为该菌株是一株柠檬色明串珠菌。上海融享生物科技有限公司主营测序包括16s价格优惠。

PCR- RFLP 法是先扩增一基因或基因片段, 再用限制性内切酶酶切扩增片段, 然后电泳分酶 切片段。PCR- RFL P 分析细菌的 16S rRNA 基 因, 可鉴定到种和亚种的水平。16S rRNA 基因的 扩增产物如用一种限制性内切酶消化得到的图谱 信息很少, 分辨率不高。因此, 对于某些菌种需要 两种或三种不同的内切酶方能作后续的鉴定。如 将该技术与 ARDRA( Amplified rDNA Restriction Analysis) 技术结合, 依据原核生物 rDNA 的保守 性, 将扩增的 rDNA 进行酶切, 然后通过酶切图谱 来分析菌间的多样性, 该法无需将试样分纯, 简 便、高效, 是一种很有发展前途的方法。根据您的具体需求选择不同的 18S ITS。全长16S测序服务

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2000 年, M Manzano 等利用温度梯度凝胶电泳的方法 分析 16S rRNA 对分离自食物中的利斯特氏菌进行了鉴定。 2001 年, HJ Monstein 等利用温度梯度凝胶 电泳和 PCR 扩增 16S rRNA 的 V6 区 ( 可变区) 片段的方法对 16 株肠球菌进行了鉴定。2001 年, 沈永才等利用 16S rRNA 的 PCR 法鉴定了 8 株 双歧杆菌, 并用 16S rRNA 荧光定量 PCR 法对双 歧杆菌进行了定量检测。2002 年, A Manero 等对 利用 16S rRNA 探针杂交的方法鉴定肠球菌属细 菌进行综述。2002 年, Y Woo- PatrickC 等通过 16S rRNA 序列分析的方法, 从一位菌血症胆囊 炎患者体内检测到了唾液乳杆菌的存在。2003 年, Y Seto 等对 16S rRNA 序列特定长度片段进 行 分 析 , 对 人 体 粪 便 样 品 中 嗜 酸 乳 杆 菌 ( Lactobacillus acidophilus) 的分布情况进行了检 测。2003 年, JR Byun 等利用分析 16S rRNA 和 23S rRNA 间区序列的方法对一株鼠李糖乳杆菌 ( Lactobacillus rhamnosus ATCC 53103) 进行了鉴 定, 并与干酪乳杆菌( L. casei) 、嗜酸乳杆菌( L. acidophilus) 和瑞氏乳杆菌( L. helveticus) 的 16S rRNA 和 23S rRNA 间区片段进行了比较。全长16S测序服务