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来源: 发布时间:2022-07-01

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常见检测细胞: **细胞(MDA-MB-231, MCF-7, HT1080, B16F10)等,用孔径为8μm的培养小室巨噬细胞、单核细胞 PMN:用孔径为5μm的培养小室内皮细胞(HUVEC)、白血病细胞 K562、骨髓瘤细胞HB124:用孔径为 3μm或5μm的培养小室 具体操作: 以配合24孔板的8μm PET膜Millicell?悬挂式细胞培养小室(cat#MCEP24H48)为例,实验周期:3-5天 复苏代数靠前的**细胞,在含有10%FBS的培养基中预先培养2-3代,待细胞汇合达到80%左右,饥饿处理18-24小时。 准备铺胶: a) 4 °C融EMC胶过夜。 b) 将细胞小室、培养板和***头等于4°C 预冷。益启生物公司带您了解细胞转染详情。金山区添加剂细胞培养报价

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取上述200μL细胞液加入小室,下室(培养板)加入900L含有10% FBS的培养基。不同规格的小室和培养板所加的体积不同,具体参考Millicell?产品说明书。37°C孵育24至72小时,依据**细胞类型而定。孵育结束,小心取出细胞小室,吸掉小室上层培养液,PBS清洗一遍,70%酒精或者4%多聚甲醛固定5min,0.5%结晶紫(2%乙醇或PBS溶解)染色20min,然后进行第8步或者第9步。PBS清洗两次以去除多余的染料,立即用棉签擦去滤膜上层的细胞,自然静置风干。显微镜下观察滤膜下层的细胞,随机选取不同的视野计数并算平均值。结晶紫溶解滤膜下层细胞,然后用33%醋酸脱色,将结晶紫完全洗脱下来,洗脱液可在酶标仪上570nm读取OD值。这种方法可以避免视野下细胞穿透不均匀带来的误差。金山区添加剂细胞培养报价

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