多克隆抗体免疫动物:抗体的效价鉴定 不管是用于诊断还是用于调理,制备抗体的目的都是要求较高效价。不同的抗原制备的抗体,要求的效价不一。鉴定效价的方法很多,包括有试管凝集反应、琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)等。常用的抗原所制备的抗体一般都有约成的鉴定效价的方法,以资比较。如制备抗抗体的效价,一般就采用琼脂扩散试验来鉴定。抗体的特异性鉴定 抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的识别能力。抗体的特异性高,它的识别能力就强。衡量特异性通常以交叉反应率来表示。交叉反应率可用竞争抑制试验测定。不同的抗体可以针对不同的病原体,形成免疫记忆以应对未来的传染。成都同种抗体补给公司
多克隆抗体免疫动物:免疫剂量与注射途径有关,一般而言,静脉注射剂量大于皮下注射,而皮下注射又比掌内和跖内皮下注射剂量大,也可采用淋巴结内注射法。加佐剂比不加佐剂的注射剂量要小,对家兔而言,采用弗氏完全佐剂,则需注射 0.5mg~1mg/kg./次,如采用弗氏不完全佐剂则注射剂量应大10 倍以上。如要制备高度特异性的抗血清,可选用低剂量抗原短程免疫法。如需要获得高效价的抗血清,宜采用大剂量长程免疫法。免疫周期长者,可少量多次。免疫周期短者,应大量少次。 两次注射的间隔时间应长短适宜,太短起不到再次反应的效果太长则失去了前一次激发的敏感作用。一般间隔时间应为 5~7 天,加佐剂者应为 2 周左右。 注射的 Ig 纯度高,则一般不易引起过敏反应,如注射血清,即使是少量,在再次免疫时,极易引起过敏反应,所以一定要采取措施。杭州同种抗体基因抗体的亲和力决定了其与抗原结合的强度,高亲和力的抗体能更有效地中和病原体。
抗体主要功能:启动补体产生攻膜复合物使细胞溶解破坏。人IgG1~3和IgM与相应抗原结合后,可因构象改变而使其CH2和CH3结构域内的补体结合点暴露,从而通过经典途径启动补体系统,产生多种效应功能,其中IgM、IgG1和IgG3启动补体系统的能力较强,IgG2较弱。IgA、IgE和IgG4本身难以启动补体,但在形成聚合物后可通过旁路途径启动补体系统。通常情况下,lgD不能启动补体。调理吞噬和ADCC。IgG可通过其Fc段与表面具有相应受体的细胞结合,产生不同的生物学作用。
抗体特性和功能:IgG于出生后3个月开始合成,3~5岁接近成人水平。IgG是血清和体液中含量很高的抗体,占血清总Ig的75%~80%。人lgG有4个亚类,根据其在血清中浓度的高低排序,分别为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。IgG的半衰期为20~23天,是再次免疫应答产生的主要抗体,其亲和力高,在体内分布普遍,具有重要的免疫效应,是机体抗传染的“主力军”。IgG1、IgG2和IgG3可以穿过胎盘屏障,在新生儿抗传染免疫中起重要作用。IgG1、lgG2和IgG3能通过经典途径活化补体,并可与巨噬细胞、NK细胞表面Fc受体结合,发挥调理作用、ADCC作用等;人IgGl、IgG2和IgG4可通过其Fc段与葡萄球菌蛋白A(SPA)结合,借此可纯化抗体,并用于免疫诊断。某些自身抗体如抗甲状腺球蛋白抗体、抗核抗体,以及引起Ⅱ、Ⅲ型超敏反应的抗体也属于IgG。多克隆抗体是由多个不同的B细胞产生的抗体,具有普遍的特异性。
抗体可变区和恒定区:可变区 重链和轻链的V区分别称为VH和VL。VH和VL中各含有3个氨基酸组成和排列顺序高度可变的区域,称为高变区(hypervariable region,HVR)或互补决定区(complementarity determining region,CDR), 包括HVR1(CDR1)、HVR2(CDR2)和HVR3(CDR3),其中,HVR3(CDR3)变化程度更高。VH的3个高变区分别位于29~31、49~58和95~102位氨基酸,而VL的3个高变区分别位于28~35、49~56和91~98位氨基酸。VH和VL的3个CDR共同组成Ig的抗原结合部位(antigen-binding site),决定抗体的特异性,是抗体识别及结合抗原的部位。在V区中,CDR之外区域的氨基酸组成和排列顺序相对保守,称为骨架区(framework region,FR)。VH或VL各有四个骨架区,分别用FR1、FR2、FR3和FR4表示。重组抗体技术使得科学家能够定制和改良抗体,以应对不同的疾病挑战。安徽同种抗体试剂
抗体工程可以通过改变抗体的结构和特性来提高其疗效和稳定性。成都同种抗体补给公司
抗体基本结构:天然Ig分子含有四条异源性多肽链,其中,分子量较大的两条链称为重链(heavy chain,H),而分子量较小的两条链称为轻链(Light chain,L)。同一Ig分子中的两条H链和两条L链的氨基酸组成完全相同。重链分子量为50 000~75 000,由450~550个氨基酸残基组成。重链恒定区的氨基酸组成和排列顺序不同,其抗原性也不同。据此,可将抗体分为5类(class),即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE,其相应的重链分别为μ链、δ链、γ链、α链和ε链。不同类的Ig具有不同的特征,如链内和链间二硫键的数量和位置、结构域的数量及铰链区的长度等均不完全相同。成都同种抗体补给公司
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