胎牛血清制备:用止血钳夹住血管,切开1厘米左右的切口进行插管,插好管后打开血管的止血钳,让牛血顺采的血管流入另一个洁净房间内的瓶中。采的血瓶采的血前经干烤灭菌(180℃2小时)后,按无菌操作注入10毫升左右经高压灭菌的生理盐水后加塞封口,于采的血前半小时放入37℃恒温箱备用。采的血前先晃动瓶内生理盐水,使其充分湿润瓶壁后倒出,再进行采的血并加塞封口。将采的血后的瓶放37℃恒温室2小时,再放入4℃冷库4小时以备离心。热灭活:一般是以56℃,30分钟来处理已解冻的血清,因为此加热步骤,可以使补体去活化。镇江去外泌体胎牛血清
胎牛血清要求:1、性状、外观:浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。2、蛋白质含量:3.5%~5.0%(w/v)。3、血红蛋白含量:≤0.02%(w/v)。4、无菌检验:阴性。5、支原体检验:阴性。6、细菌内的毒性:≤5(EU/ml)。7、牛腹泻病毒:阴性。8、大肠杆菌噬菌体:阴性。9、支持细胞增殖:(Sp2/0-Ag14)生长曲线(接种浓度)较大增殖浓度≥2.5×106个/ml,细胞倍增时间:≤15h,克隆率:≥85%。血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、无机物等。合肥进口血清血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。
胎牛血清应该如何保存,可以存放多久?胎牛血清可长期储存于-20℃冰箱中。倘若把胎牛血清存放在4℃冰箱,请不要超过一个月。如果一次性无法用完一瓶血清,建议将胎牛血清无菌条件下分装并储存于-20℃,避免反复冻融。如何正确地解冻胎牛血清?采用逐步解冻法,将胎牛血清从-20℃冰箱转入4℃冰箱融解,随后分装。切忌直接将胎牛血清从-20℃冰箱转移至室温解冻,这样很容易因为温度变化太大导致胎牛血清中的蛋白质凝集从而出现沉淀。
胎牛血清有必要做热灭活吗?实验证明,经过正确处理的热灭活胎牛血清,对于大多数的细胞而言都是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至可能因为高温处理影响了血清的质量,从而造成细胞生长速率的降低。经过热处理的血清,沉淀物的形成会明显的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常?;崛醚芯空呶笠晕茄逶馐芪廴荆蜒宸旁?7℃环境中,又会使此类沉淀物增加得更多,这常常会使研究者误认为是微生物的分裂扩增。因此我们建议客户,若非必须,可以不需要做热处理这一步。如此一来,不但节省客户宝贵的时间,更确保血清的质量。胎牛血清FBS一般需要冷冻保存。
胎牛血清:胎牛血清参与细胞培养,是细胞生长天然的培养基,它为细胞提供生长因子、结合蛋白、脂质、矿物质、黏附和铺展因子等来促进体外细胞培养。透析胎牛血清主要用于可能需要关注小分子浓度的特殊研究。这主要包括四个领域:蛋白质组学、同位素标记、细胞通讯以及报告基因细胞系的筛选,其中有些领域是相互交叉的。以下稍作举例。将13C或15N标记的氨基酸掺入到培养基中培养细胞,来标记细胞内新合成的蛋白质,一般培养5-6代,细胞中的蛋白质将都被同位素标记。然后质谱分析,即可比较经过不同处理的细胞,其内部蛋白质丰度的变化。胎牛血清的蛋白质含量:3.5%~5.0%( w/v);血红蛋白含量 ≤ 0.02%( w/v)。上海标准级血清
胎牛血清的细菌内有毒的 ≤5(EU/ml);牛腹泻病毒:阴性;大肠杆菌噬菌体:阴性。镇江去外泌体胎牛血清
如何区别真假胎牛血清:外观,拿到血清,较先接触的是血清外观,对于缺少细胞培养经验的人来说,外观的判断尤为重要,颜色根据血红蛋白含量的不同,胎牛血清可表现出黄色或红色,我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl,实际上,血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响,这个指标的意义在于能体现出采的血过程的严谨规范程度,良好的操作能降低血清的溶血。国产血清的点很分散,大多是由屠户采的血后马上离心收集,所以很少会有溶血,表现出明亮的蜡黄色,当然,国产血清也很少有标准意义上的胎牛血清。进口胎牛血清或多或少总有点溶血,因为真正的胎牛血清凝血功能差,红细胞容易破裂。总的来说,国产的血清呈现出蜡黄。进口的血清,质量较好的呈现出谈黄、微红色,差点的呈现出橘红色或鲜红色。当然,热灭活胎牛血清或保存不当的血清,由于血红蛋白的破坏氧化,会呈现出暗红,甚至咖啡色。镇江去外泌体胎牛血清
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