Q：荧光素酶作为报告基因相比于荧光蛋白有哪些优势？Luciferase的灵敏度相比于GFP提高10-100倍以上，同时具有更宽的动态范围，便于数值分析比较，不需要荧光显微镜，而且在***实验中其荧光穿透性高于EGFP等荧光蛋白，同时由于没有内源活性、其本底信号很低。而GFP等荧光蛋白相比于荧光素酶的优势在于可以进行失踪定位，并且其观测不需裂解细胞，方便进行适时观察。Q：海肾荧光素酶和萤火虫荧光素酶相比，相对活性如何？在氧、镁和ATP的存在下，萤火虫荧光素酶作用于甲虫荧光素，而来源于海洋腔肠（Renillareniformis)的荧光素酶在氧的存在下作用于海肾荧光素。双报告基因技术（Dual-reporterassays）,结合了萤火虫荧光素酶测试和海肾荧光素酶测试。Q：双荧光素酶报告基因实验转染效率很低而且复孔重复不出来是什么原因？转染效率低的话可以从三个方面改善，首先要确保细胞状态是好的，通常我们选出处于分裂期的细胞，另外阳性对照您可以选择过表达的荧光蛋白质粒，还有就是DNA的质量尤为重要，更好是先酶切验证。这个实验检测结果很灵敏，有一定差异是正常的，通常只要确保它在一个数量级之内即可。如果差异超出这个范围可以从两方面改善，一是记住保持样本的均一性。荧光素酶作用下的D-荧光素钾盐。常州游离酸D-荧光素钾盐保质期

    产品描述D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍应用于整个生物技术领域，特别是体内***成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下，荧光素底物能够被氧化发光。当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性（见下图）。将携带荧光素酶编码基因（Luc）的慢病毒转染入细胞后构建稳定表达细胞株，构建原位**模型，之后注入荧光素底物，通过IVIS系统来检测光强度变化，从而实时监测疾病发展状态或进行药物药效评价等。也可以利用ATP对此反应体系的影响，根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。注：在抗**药物药效评价试验中，由于生物自发光检测需要根据荧光素表达标定**大小，受**生长所发生的**内部坏死影响，生物自发光并不能很***的评价**生长，在抗**药效评价有较高要求的实验中，建议使用小动物核磁成像系统检测**生长。D-荧光素也常用于体外研究，包括荧光素酶和ATP水平分析；报告基因分析；高通量测序和各种污染检测。目前有三种产品形式：D-荧光素（游离酸），D-荧光素盐（钠盐和钾盐）。主要差别在于溶解特性：前者的水溶性以及缓冲体系的溶解性都较弱，除非溶于弱碱如低浓度NaOH和KOH溶液?？扇苡诩状己虳MSO。 徐州专业做D-荧光素钾盐使用说明D-荧光素钾盐检测公司招代理吗？

    就可以用高敏感度的CCD相机对动物体内进行***观察而不会伤害到动物本身。在萤光素酶中加入正确的萤光素底物就可以放出荧光，而发出的光子可以被光敏感元件，如萤光探测器或改进后的光学显微镜探测到。这就使得对包括***在内的多种生命活动进程进行观察成为可能。例如，萤光素酶已经被用于商业化的次世代焦磷酸定序技术，借由dNTP接上DNA链时水解放出的焦磷酸，透过另外一个硫酸盐腺甘酸转移酶反应，萤光素酶能将产物ATP与萤光素转化为冷光，机器借此探测光线并定序。萤光素酶也可以被用于检测血库中所存血液中的红血球是否开始破裂。法医可以用含有萤光素酶的溶液来检测犯罪现场中残留的血迹。医院用萤光素酶的发光来发现特定的疾病。萤光素酶还可以作为“报告蛋白”被用于分子生物学研究中，例如，用于在转染过萤光素酶的细胞中检测特定启动子的转录情况或用于探测细胞内的ATP的水平；这一技术被称为报告基因检测法或萤光素酶检测法（LuciferaseAssay）。萤光素酶是一个热敏感蛋白，因此经常被用于研究蛋白热变性过程中热休克蛋白的?；つ芰?。此外，萤光素酶水母素的发光强度与环境中钙离子浓度相关，因此可用于检测生物体内的钙。

    可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式进行半衰期为一小时的“辉光型”信号在大量检测板之间提供一致的信号与标准细胞生长培养基兼容海肾荧光素酶海肾萤光素酶是一种从海桑（Renillareniformis）分离的36kDa蛋白。与萤火虫荧光素酶相比，海肾荧光素酶的底物和辅因子要求不同。海肾荧光素酶在氧气存在下使用腔肠素，产生480nm的蓝光。与萤火虫萤光素酶类似，海肾萤光素酶因其底物要求和光输出方面的差异而可用于双重报告检测。Amplite?海肾荧光素酶报告基因测定Amplite?Renilla萤光素酶报告基因检测试剂盒（#AAT-12535）提供了一种快速，灵敏的方法，可以使用专有的发光配方在基于细胞的检测中检海肾萤光素酶的活性，与海肾萤光素酶相互作用后，该试剂产生具有强光的产物。Amplite?海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒特点：该测定法与标准细胞生长培养基兼容该试剂盒可以测量野生型和合成hRluc基因的原始表达或基因表达每个试剂盒均包含可以方便96孔和384孔板检测所必不可少的组分各类萤光素酶底物，辅因子和物理特性：近几十年来，腺苷三磷酸(ATP)生物发光技术得到了很大的发展，已经在细胞增殖、细胞毒性和生物量计数等方面广泛应用。D-荧光素钾盐使用的注意事项。

    具体实验流程：注：该操作流程通常用来检测转染了萤火虫荧光素酶基因的真核细胞中荧光素酶表达的活性，不适用于对细菌荧光素酶进行检测。1．实验***天，消化并接种细胞（根据具体实验选择合适的细胞）于35mm细胞培养皿，置于5％CO2、饱和湿度的37℃培养箱内培养过夜。2．等细胞密度达到70％时用Luciferase报告基因质粒、LacZ的表达质粒及其它质粒（根据具体实验确定）共转染细胞（根据具体实验选择转染方法，如磷酸钙沉淀法、PEI、lipofectamine2000等均可）。3．转染24－36h后，吸取培养液，用预冷的PBS（无钙和镁离子）洗涤细胞。注：荧光酶的酶促反应会被痕量的钙所抑制，故用磷酸钙转染的细胞在收集细胞前应充分洗涤除去含钙介质。4．在每个培养皿中加入350μl预冷的harvestbuffer,于4℃或冰上放置10min裂解细胞。5．在细胞裂解期间，准备足量的ml微量离心管，将ATPbuffer与luciferinbuffer以1：，每管100μl。6．依次取等体积的细胞裂解液（100μl）至步骤5中的离心管中，迅速混匀，在发光仪（Luminometer）上读取吸光值。注：发光反应会迅速衰减，将细胞裂解液加入反应液后5s内必须读取吸光值。7．确保以相同操作手法读取全部样品吸光值后。南京D-荧光素钾盐测试公司哪家便宜。连云港D-荧光素钾盐哪家好

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    2）按10μL/g体重的浓度向每支小鼠注射相应量的15mg/mL荧光素溶液；3）腹腔注射10-15min后进行成像分析。（对每只动物模型做荧光素动力学研究以确定峰值信号获取时间）Firefly,freeacid/D-萤火虫荧光素分子式：C11H8N2O3S2分子量：g/mol外观：白色至浅黄色粉末溶解：，形成近乎无色至浅黄色的清夜保存：-15°C避光应用：1）活细胞、组织或生物体内luc标记基因和荧光素酶-融合基因体内/体外表达的成像分析；2）***用于报告基因分析，免疫分析和ATP荧光卫生监测分析D-荧光素也常用于体外研究，包括荧光素酶和ATP水平分析；报告基因分析；高通量测序和各种污染检测。目前有三种产品形式：D-荧光素（游离酸），D-荧光素盐（钠盐和钾盐）。主要差别在于溶解特性：前者的水溶性以及缓冲体系的溶解性都较弱，除非溶于弱碱如低浓度NaOH和KOH溶液，可溶于甲醇和DMSO；后者易溶于水或缓冲液中，使用方便，溶剂d0926aa8-0148-40da-80fa-f65性，特别适合体内实验。配成溶液后的这三种产品，在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。相关列表鲁米诺/3-氨基苯二甲酰肼/发光氨异鲁米诺/4-氨基邻苯二甲酰肼吖啶酯DMAE-NHS吖啶酰肼NSP-SA-ADH吖啶酯ME-DMAE-NHS哌嗪-N,N'-二。常州游离酸D-荧光素钾盐保质期

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