可用荧光素酶检测系统灵敏方便地测定荧光素酶基因的表达。荧光素酶报告基因有许多优点：①非放射性；②比CAT及其他报告基因速度快；③比CAT灵敏100倍；④荧光素酶在哺乳细胞中的半衰期为3小时，在植物中的半衰期为3．5小时。由于半衰期短，故启动子的改变会即时导致荧光素酶活性的改变，而荧光素酶不会积累。相反，CAT在哺乳细胞中的半衰期为50小时。荧光素酶浓度在10—16mol/L（10pS/L）到10-8mol/L（1mg/L）范围内，荧光信号强度与酶浓度成正比。在理想条件下，可检测到l0-20mol/L的荧光素酶。检测步骤：1．用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。2．设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。3．筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。4．扩增转录因子质粒，提纯备用。同时准备相应的空载质粒对照，提纯备用。5．培养293（或其它目的细胞），并接种于24孔板中，生长10-24小时（80%汇合度）。6．将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。7．提取蛋白并用于荧光素酶检测。8．加入底物，测定荧光素酶的活性。9．计算相对荧光强度，并与空载对照比较。D-荧光素钾盐应立即使用，或分装于-20℃避光保存，避免反复冻融。苏州荧光素D-荧光素钾盐哪家好

    可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式进行半衰期为一小时的“辉光型”信号在大量检测板之间提供一致的信号与标准细胞生长培养基兼容海肾荧光素酶海肾萤光素酶是一种从海桑（Renillareniformis）分离的36kDa蛋白。与萤火虫荧光素酶相比，海肾荧光素酶的底物和辅因子要求不同。海肾荧光素酶在氧气存在下使用腔肠素，产生480nm的蓝光。与萤火虫萤光素酶类似，海肾萤光素酶因其底物要求和光输出方面的差异而可用于双重报告检测。Amplite?海肾荧光素酶报告基因测定Amplite?Renilla萤光素酶报告基因检测试剂盒（#AAT-12535）提供了一种快速，灵敏的方法，可以使用专有的发光配方在基于细胞的检测中检海肾萤光素酶的活性，与海肾萤光素酶相互作用后，该试剂产生具有强光的产物。Amplite?海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒特点：该测定法与标准细胞生长培养基兼容该试剂盒可以测量野生型和合成hRluc基因的原始表达或基因表达每个试剂盒均包含可以方便96孔和384孔板检测所必不可少的组分各类萤光素酶底物，辅因子和物理特性：近几十年来，腺苷三磷酸(ATP)生物发光技术得到了很大的发展，已经在细胞增殖、细胞毒性和生物量计数等方面广泛应用。苏州荧光素D-荧光素钾盐哪家好做D-荧光素钾盐测试工作液是先用现配。

    LAR）Promega公司推出的第一种萤光素酶检测试剂LuciferaseAssaySystem（LAR），为灵敏、非放射性的报告基因检测拉开了序幕。LAR与萤火虫萤光素酶（luc）报告基因一起，为研究人员开始了解基因表达调控因子提供了首要的工具。[1]1995Dual-Luciferase?报告基因检测系统（DLR）DLR是第一种允许在单个样本中依次检测两个报告基因的试剂。通过允许萤光素酶活性的内部归一化，在提高报告基因检测的可靠性方面取得了关键进展。此外，pGL3报告基因载体系列具有改良后的萤火虫萤光素酶基因，luc+。这个改造一种报告基因以实现性能改进的例子后来被进一步应用到pGL4和luc2报告基因上，通过生物信息学和合成方法，实现了更大的改进。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重组萤光素酶Promega公司在早期推出的一种重组萤火虫萤光素酶（Enliten）基础上，改造出了一种称为UltraGlo?的热稳定性萤光素酶。UltraGlo?的开发是在各种检测和储藏条件下进行一步法“加样-读数”检测的关键。此后，通过开发新的方法来改变萤火虫萤光素酶检测的信号动力学，例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允许使用微孔板进行检测。而“加样-读数”的形式简化了样品处理。

    按照150mg/kg的荧光素/体重浓度进行注射，以小鼠为例，每只小鼠体重假定20g，每只小鼠用量3mg；4）注射入体内10-15min（待光信号达到更强稳定平台期）后进行成像分析。注：建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定更高信号检测时间和信号平台期。注意事项1）本品（fireflyluciferin）和甲虫荧光素（beetleluciferin）、萤光素钾盐只是不同别名，以CAS号115144-35-9为准。2）注射方式、动物类型以及体重等都会影响信号的发射，因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线，确定更佳信号平台期和更佳的检测时间。3）如果要进行ATP的检测，尽量避免外源ATP的污染，如操作时戴手套并使用ATP-free的实验耗材，在进行荧光素的溶解时应使用ATP-free无菌水。4）为避免反复冻融，本产品配制成溶液后建议适当分装后-20℃或-80℃保存。为防止氧化，如有条件，可以对储存液充氮气或氩气后保存。5）对于检测灵敏度要求特别高的实验，建议使用新鲜配制的本产品。6）在进行D-荧光素钾盐的溶解时，应使用无钙镁离子的DPBS，因钙镁离子可能会抑制荧光素酶的活性，此外镁离子可能会对荧光素的氧化造成影响，从而影响检测。7）为了您的安全和健康。D-荧光素也常用于身体的外部研究。

    后者能够易溶于水或缓冲液中，使用方便，溶剂无毒性，特别适合体内实验。配成溶液后的这三种产品，在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。产品性质运输和保存运输条件：4℃冰袋运输；短期保存：4℃干燥避光长期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期长期保存：有效期一年工作液：先用现配使用方法1.体外生物发光检测1）用无菌蒸馏水溶解D-荧光素钾盐，配制成30mg/mL的储存液(100-200×)，混匀。立即使用，或分装于-20℃避光保存，避免反复冻融。2）用预热好的组织培养基将储存液稀释至mg/mL的工作液浓度。3）去除细胞培养基。4）待图像分析前，向细胞内添加荧光素工作液，37℃孵育5-10min，然后进行图像分析。2.***成像分析1）用无菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的荧光素的储存液，混匀。2）用μm滤膜过滤除菌。立即使用，或分装于-20℃避光保存，避免反复冻融。3）腹腔注射（.），按照150mg/kg的荧光素/体重浓度进行注射，以小鼠为例，每只小鼠体重假定20g，每只小鼠用量3mg；4）注射入体内10-15min（待光信号达到更强稳定平台期）后进行成像分析。注：建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定更高信号检测时间和信号平台期。 D-荧光素有时候也叫游离酸。荧光pcr试剂

D-荧光素钾盐母液保存条件是-20℃避光。苏州荧光素D-荧光素钾盐哪家好

    luciferyladenylate）+PPi萤光素化腺苷酸+O2→氧荧光素+AMP+光这一反应非常节省能量，几乎所有输入反应的能量都被转化为光。与之形成鲜明对比的是人类使用的白炽灯，只有越10%的能量被转化为光，剩余的能量都变为热能而被浪费。分析荧光素或荧光素酶不是特定的分子，而是对于所有能够产生荧光的底物和其对应的酶的统称，虽然它们各不相同。不同的能够控制发光的生物体用不同的荧光素酶来催化不同的发光反应。更为人所知的发光生物是萤火虫，而其所采用不同的荧光素酶与其他发光生物如荧光菇（发光类脐菇，Omphalotusoleariu'）或许多海洋生物都不相同。在萤火虫中，发光反应所需的氧气是从被称为腹部气管（abdominaltrachea）的管道中输入。一些生物，如叩头虫，含有多种不同的荧光素酶，能够催化同一荧光素底物，而发出不同颜色的荧光。萤火虫有2000多种，而叩甲总科（包括萤火虫、叩头虫和相关昆虫）则有更多，因此它们的荧光素酶对于分子系统学研究很有用。目前研究得更透彻的荧光素酶是来自Photinini族萤火虫中的北美萤火虫（Photinuspyrali'）。应用荧光素酶可以在实验室中用基因工程的方法生成，并被用于多种不同的实验。苏州荧光素D-荧光素钾盐哪家好